骨质疏松症(osteoporosis,OP)目前已经成为最常见的全身性骨代谢疾病之一,因其易合并腕部、腰椎、髋骨等部位的骨折,对人类、尤其是对妇女和老年人的健康构成了很大的威胁。跌倒是引起骨折的主要原因之一,老年人因为平衡能力下降造成跌倒率增加,给患者带来极大伤害。中医药治疗骨质疏松具有广阔的前景,复方仙贞汤对改善骨质疏松症患者的症状和提高骨密度有很好的疗效,进一步研究其治疗骨质疏松的作用机制和改善平衡的能力,定会为骨质疏松的治疗提供新的思路。目的:1.通过临床试验,观察复方仙贞汤对绝经后骨质疏松妇女的肌力和平衡能力的影响,以评价其预防跌倒的效果。2.进行细胞实验,用MTT法观察复方仙贞汤对成骨细胞增殖和用流式细胞仪检测复方仙贞汤抑制成骨细胞凋亡的情况,从细胞分子水平探讨其治疗骨质疏松的作用机制。方法:临床试验:选择北京地区50-80岁之间绝经后的骨质疏松妇女,采用随机对照的研究方法,分为复方仙贞汤组、仙灵骨葆组、金尔力(鲑鱼降钙素鼻喷剂)组和单纯运动组。四组均同时采用运动疗法,即每周三天,每天散步(120步/分)半小时。治疗组加服复方仙贞汤,每日一剂分两次水煎服;仙灵骨葆组加服仙灵骨葆胶囊,每次口服2粒,每日三次;金尔力组加用金尔力鼻喷剂,每日一喷,同时每日服用钙尔奇D600mg;治疗期间均禁止同时服用雌激素类、双磷酸盐等影响骨代谢的药物,3个月为1个疗程,治疗2个疗程。观察项目:服药前后平衡能力测试(包括平衡木上行走、起立-走、闭眼单足站立、强化Romberg测试)、血清睾酮和雌二醇水平、腰椎及股骨颈的骨密度和腰脊酸痛等各项症状。细胞实验:成骨细胞系UMR106,用含10%胎牛血清的MEM培养液培养长满至单层,消化后调其浓度为2.0*104个/ml,接种于96孔板。再按分组换成含不同浓度(分别为1 mg/L,5 mg/L,10 mg/L,50 mg/L,100 mg/L,500 mg/L,1000 mg/L)复方仙贞汤的培养液,培养完成后用MTT法检测成骨细胞增殖率。抑制凋亡实验,细胞培养方法同上,接种于六孔板,预培养后分组加液①空白对照组:仅加含10%胎牛血清的MEM培养液②模型组:加浓度为30ng/ml的TNF-α培养液诱导③治疗组:都加入浓度为30ng/ml的TNF-α,同时再分4组分别加不同浓度的复方仙贞汤培养液(浓度分别为500 mg/L ,50 mg/L,10 mg/L ,1 mg/L),然后再培养72小时。消化后收集的细胞用70%冷乙醇固定和PI单染色,最后上流式细胞仪检测。结果:1.临床试验:平衡能力测定:复方仙贞汤组的起立-走和强化Romberg试验,疗后比疗前显著改善(P<0.05),其余各组均无显著性变化。骨密度:复方仙贞汤组的腰椎骨密度,治疗后比治疗前显著提高(P<0.01),股骨颈骨密度无显著性变化;金尔力组腰椎和股骨颈的骨密度疗后比疗前均显著性提高(均P<0.01);复方仙贞汤组和金尔力组疗后的腰椎骨密度比较无显著性差异(P=0.327);仙灵骨葆组和运动组的腰椎和股骨颈骨密度疗后均无显著性变化。血清睾酮和雌二醇:各组治疗前后比较均无显著性差异(P>0.05)。症状:四组组间比较有显著性差异(P<0.01),但复方仙贞汤改善腰脊酸痛和全身的症状最显著。2.细胞实验:复方仙贞汤可以促成骨细胞增殖,以50mg/L浓度组促增殖作用最显著。复方仙贞汤能抑制TNF-a诱导的成骨细胞凋亡, 500mg/L浓度组和1mg/L浓度组的凋亡率比模型组显著性减少(P<0.01),以1mg/L浓度组抑制作用最佳。复方仙贞汤500mg/L、10mg/L和1mg/L浓度干预的成骨细胞,处于G0-G1期的显著性减少(P<0.01﹚;而在S期,所有浓度组的细胞均较模型组显著性增加(P<0.01﹚,以500mg/L浓度组最高;在G2-M期,50mg/L和1mg/L浓度组的细胞均显著性减少(P<0.01和P<0.05﹚。结论:1.复方仙贞汤能部分提高绝经后骨质疏松症患者的动态平衡能力和静态平衡能力,初步判断与提高患者的下肢肌力和改善本体感觉有关,对预防跌倒有一定的作用。2.复方仙贞汤能明显改善骨质疏松症患者的症状,并且优于其他治疗组。3.复方仙贞汤可以提高绝经后骨质疏松患者的腰椎骨密度,维持股骨颈骨密度。4.复方仙贞汤能促进成骨细胞的增殖,与浓度相关,以较低浓度(50mg/L)作用最明显。5.复方仙贞汤可以抑制TNF-a诱导的成骨细胞凋亡,与浓度相关,以低浓度(1 mg/L)抑制作用较好。6.不同浓度复方仙贞汤影响的细胞周期不同,高浓度主要影响G0-G1期和S期,而低浓度对G0-G1、G2-M、S期均有影响。创新点:1.目前对中医与运动平衡的研究报道较少,本研究回顾了历史文献,阐述了中医调整动态平衡的理论基础,并通过临床试验进一步证实,初步认为通过调整内部阴阳脏腑、气血津液的平衡,可以提高运动平衡能力。2.目前骨质疏松的研究和治疗多着重于骨本身,但本课题从中药制剂复方仙贞汤对绝经后骨质疏松症患者的肌力和平衡能力的影响着手,探讨中药对骨质疏松症运动平衡的作用,为骨质疏松的研究和治疗开阔了思路。