CAS下调Twist抑制SMMC-7721干样细胞EMT

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目的研究紫花牡荆素(casticin, CAS)对源自人肝癌SMMC-7721细胞系的肝癌干样细胞(liver cancer stem-like cells, LCSLCs)上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)的影响及其分子机理。方法体外培养人肝癌SMMC-7721细胞系细胞;免疫磁珠法从人肝细胞癌SMMC-7721细胞系分选CD133+细胞和CD133-细胞;PE-CD133标记FCM分析CD133表达;干细胞条件培养基悬浮培养法扩增CD133+球形成细胞(sphere-forming cells, SFCs)(LCSLCs);Western blotting分析CAS对E-cadherin、N-cadherin及转录因子Twist表达的影响;pcDNA3.1-Twist转染法使Twist在LCSLCs中过表达,利用Western blotting从蛋白水平鉴定转染效果。结果与CD133-细胞及未分选细胞相比,源自人肝癌SMMC-7721细胞系的CD133+球形成细胞(sphere-forming cells, SFCs)具有更强的肿瘤球形成能力,证实其具有肝癌干细胞样细胞自我更新特征。人肝癌SMMC-7721细胞系LCSLCs在含10%胎牛血清的DMEM培养基中贴壁生长时,呈现出梭形即间质细胞表型;而非分选细胞在含10%胎牛血清的DMEM培养基中贴壁生长时,表现为多边形即上皮细胞表型,1.0μM casticin处理48h,LCSLCs在含10%胎牛血清的DMEM培养基中贴壁生长呈现向多边形即上皮细胞表型过渡的表型。与非分选细胞相比,CD133+SFCs中N-cadherin和Twist蛋白表达量较高,而E-cadherin蛋白的表达量则较低。说明:SMMC-7721细胞系CD133+SFCs展示出EMT表型。CAS能使LCSLCs中的E-cadherin表达上调,N-cadherin表达下调;CAS能下调LCSLCs的EMT-相关转录因子Twist的表达;CD133+SFCs中Twist过表达可削弱CAS对LCSLCs自我更新和EMT的影响。结论1.人肝癌SMMC-7721细胞系CD133+SFCs具有肝癌干细胞样细胞自我更新特性,并展示出EMT表型。2.下调Twist蛋白表达可能是CAS抑制肝癌干细胞样细胞自我更新和逆转EMT作用机制之一。
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