环戊烷并多氢菲碳骨架与不同的官能团侧链相连接的四环脂肪烃是甾体化合物基本结构,大多数的甾体类成分结构中含羰基。其稳态失调与多种疾病的发生发展密切相关。由于甾体化合物结构相似、体内浓度低、离子化效率差、易受生物基质中其它成分干扰,通常通过衍生化试剂对该类成分进行衍生化,再进行液质联用分析。为了研究双羰基甾体化合物的衍生化行为,本课题利用经典的羰基衍生化试剂吉拉德T对双羰基甾体化合物进行衍生化,并利用UPLC-QTRAP-MS/MS研究了衍生化试剂的用量对标准品的单、双衍生产物形成的影响。研究结果表明,过量的衍生化试剂会导致单衍生产物向双衍生产物转化。常规分析中利用单衍生产物对双羰基甾体化合物进行定量分析可能不准确,而利用双衍生产物对双羰基甾体化合物进行定量分析时灵敏度较低,但准确性更好。因此,在对多羰基甾体化合物进行定量分析时,需要确保衍生化反应进入平台期后没有发生进一步转化反应。为了对血液中的双羰基甾体化合物进行定性分析,本课题对双羰基甾体化合物标准品经GT衍生化后的单、双衍生产物的质谱裂解规律进行了总结。随后将化学衍生化、UPLC-MS/MS、氢/氘交换技术相结合,对人血清中双羰基甾体化合物进行了定性分析。利用氢/氘交换质谱技术区分含羟基的单羰基甾体化合物和双羰基甾体化合物,得以可靠地发现人血清中的双羰基甾体化合物。最终从人血清中鉴定到92个含羰基甾体类化合物,通过氢/氘交换质谱技术确定其中的30个为双羰基甾体化合物。本课题的研究揭示了双羰基甾体化合物与衍生化试剂反应的规律,为该类成分的准确定量分析提供了借鉴。建立的基于化学衍生化、氢/氘交换、UPLCMS/MS技术的策略为复杂体系中双羰基甾体化合物的鉴定提供了一种新的分析方法。所鉴定的双羰基甾体化合物对于发现甾体类生物标志物具有重要意义。