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目的：应用蛋白质组学技术比较高分化胃腺癌与低分化胃腺癌组织的差异蛋白,初步确定胃癌分化相关蛋白,研究其作用机制,为确定胃癌分化相关肿瘤标志物及改善胃癌患者的诊断及治疗提供实验及理论依据。方法：收集手术切除的新鲜胃癌组织,根据病理诊断报告将胃癌标本分为高分化胃腺癌组、低分化胃腺癌组。提取组织总蛋白,蛋白定量,采用双向凝胶电泳(2-DE)技术分离蛋白,比较得到高分化与低分化胃腺癌组织的双向凝胶电泳图谱,采用PDQuest8.0软件进行图谱匹配和差异分析,切取表达差异明显的蛋白点,通过MALDI-TOF MS或MS/MS方法进行质谱分析及网上数据库鉴定蛋白质。通过查找文献资料选取感兴趣蛋白及其相关蛋白,应用Western Blot方法进行验证,检测它们是否与蛋白质组学方法检测结果一致以及在不同分化胃腺癌组织及其癌旁组织中的表达趋势。结果：(1)共鉴定出7个蛋白,其中在低分化腺癌组织中高表达的蛋白有5个：钙结合蛋白前体(calreticulin precursor), TapasinERP57异源二聚体(tapasinERP57 heterodimer),丙酮酸激酶M2型(pyruvate kinase isozymes M1/M2 isoform M2),谷胱甘肽巯基转移酶胎盘型(class Pi glutathione S-transferase)及烯醇化酶1 (chain A, crystal structure of human enolase 1),在高分化腺癌组织中高表达的蛋白有2个：肌球蛋白11亚型SM2A (myosin-11 isoform SM2A),肌动蛋白主动脉平滑肌型(actin, aortic smooth muscle)。差异蛋白可归纳为3类：①细胞骨架蛋白：肌球蛋白11亚型SM2A,肌动蛋白主动脉平滑肌型；②分子伴侣：钙结合蛋白前体,TapasinERP57异源二聚体；③代谢相关蛋白：丙酮酸激酶M2型,烯醇化酶1,谷胱甘肽巯基转移酶胎盘型。(2)选择丙酮酸激酶M2 (PKM2)及其同工酶丙酮酸激酶LR型(PKLR),烯醇化酶1(ENO1)及其同工酶神经元特异性烯醇化酶/烯醇化酶2 (NSE/ENO2),以及与二者同为糖酵解酶类的醛缩酶A (Aldolase A),用Western Blot技术进行验证,结果显示丙酮酸激酶M2(PKM2)及烯醇化酶1(ENO1)与蛋白质组学研究结果一致,与高分化腺癌相比,其在低分化腺癌组织中高表达；同为糖酵解酶类的醛缩酶A (Aldolase A)与丙酮酸激酶M2(PKM2)及烯醇化酶1(ENO1)在高低分化胃腺癌组织中表达趋势一致,相对于高分化腺癌组织,在低分化腺癌组织中高表达；丙酮酸激酶LR型(PKLR)与其同工酶丙酮酸激酶M2(PKM2)在高低分化胃腺癌组织中表达趋势相反,其在高分化腺癌中高表达；神经元特异性烯醇化酶／烯醇化酶2(NSE/ENO2)与其同工酶烯醇化酶1(ENO1)在高低分化胃腺癌组织中表达趋势相同,其在低分化腺癌中高表达；同时用Western Blot方法验证烯醇化酶1(ENO1)在胃低中高分化腺癌组织及其癌旁组织中表达呈线性下降趋势。结论：通过蛋白质组学研究证明胃癌分化是一个多因素参与的复杂过程,其中涉及诸如细胞骨架蛋白(肌球蛋白11亚型SM2A、肌动蛋白主动脉平滑肌型)、分子伴侣(钙结合蛋白前体,TapasinERP57异源二聚体)、代谢相关蛋白(丙酮酸激酶M2型、烯醇化酶1、谷胱甘肽巯基转移酶胎盘型)等多种蛋白。糖酵解酶类如丙酮酸激酶M2型及烯醇化酶1在低分化腺癌中的过度表达在一定程度上证明糖酵解在胃癌分化过程中可能发挥重要的作用,这些蛋白有可能成为胃癌分化相关的肿瘤标志物,为临床个体化诊断及治疗提供依据,有望改善胃癌患者的预后,降低低分化腺癌患者死亡率。