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免疫亲和层析是一种非常有效的生物大分子纯化方法，特别是应用在纯化过程的第一步。本论文根据卵黄免疫球蛋白（IgY）产量大、易于分离等特点，将其作为免疫亲和配基分离相应抗原。 选用长白山白眉蝮蛇蛇毒中的Gln49磷脂酶A2（Gln49-PLA2）为抗原免疫产蛋鸡，收集鸡蛋，以天数和ELISA数值（OD值表示IgY相对活性）为坐标绘制免疫滴定曲线，结果表明三次加强免疫后可持续获得抗体，在免疫后51天相对活性达到最高（0.654），一年后抗体的相对活性维持在0.614，证明特异性抗体的含量至少在一年内基本不变。 几种PEG6000沉淀法粗分IgY的结果显示卵黄液采用PEG6000-乙醇沉淀法，得到的IgY纯度最高，特异活性强，卵磷脂去除较彻底，利于长期保存；用偶联Gln49-PLA2的Sepharose 4 Fast Flow的亲和介质从卵黄液中一步分离得到特异性抗体，抗体活性提高39倍；以抗GIn49-PLA2-Sepharose 4 Fast Flow的特异性IgY重复上样，收集相应组分，根据Langmuir-type吸附等温曲线，测定免疫亲和介质的最大载量qm为0.59 mg/mlgel，解离常数Kd为4.4×10-5mg/ml；Western-blot显示抗原与抗体特异性结合。 以抗GIn49-PLA2特异性IgY为配基偶联到溴化氰活化的Sepharose 4 Fast Flow介质上，一步分离长白山白眉蝮蛇粗毒中的Gln49-PLA2，所得目的蛋白纯度高达95％，回收率大于83％，产率约为13％，与实验室四步分离Gln49-PLA2相比，步骤简单，产率提高6.5倍；Anti-Gln49-PLA2-IgY-Sepharose 4 Fast Flow亲和介质的最大载量qm为0.49mg/ml gel，解离常数Kd为1.66×10-7mg/ml，表明以anti-Gln49-PLA2特异性IgY为配基时不需要苛刻的洗脱条件，是比较理想的生物亲和配基；配基使用60次后，性质仍保持稳定无泄漏情况发生。 以Anti-Gln49-PLA2特异性IgY作为配基纯化大肠杆菌中表达的重组Gln49-PLA2，目的蛋白纯度从4.98％提高到11.5％。