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一研究目的植物雌激素(phytoestrogen, PE)是从天然植物中提取的结构与内源性雌激素相似的一类化合物,能够与雌激素受体(estrogenreoePtors, ERs)结合发挥生物学效应,具有雌激素和抗雌激素双重效应,发挥何种效应取决于内源性雌激素的水平和特异性的组织类型。流行病学研究发现,植物雌激素在许多疾病的预防和治疗方面均能发挥有益的作用,这些疾病心血管疾病、围绝经期综合症以及雌激素相关肿瘤(乳腺癌、前列腺癌)等。然而,研究中也发现了不一致的实验结果。因此,对其作用机制的研究和阐明自然成为研究者们关注的热点。作为中医治病用药的最主要形式之一,具有植物雌激素样作用的中药及其组成复方在这些疾病的预防和治疗中发挥了重要的作用。本实验通过观察不同浓度的丹参酮1对人乳腺癌T47D细胞增殖作用的影响,检测其对靶细胞雌激素受体亚型的调节作用及其效应,探讨丹参酮Ⅰ的植物雌激素样活性以及可能的作用机制,为指导妇科临床用药,特别是为围绝经期妇女的保健以及乳腺癌等雌激素依赖型肿瘤患者的用药提供理论基础和实验依据。二研究方法和结果1丹参酮Ⅰ对T47D细胞增殖和细胞周期的影响以丹参酮Ⅰ为研究对象,在体外细胞实验中,通过MTT法检测其对ER阳性人乳腺癌T47D细胞增殖的影响；流式细胞术检测丹参酮Ⅰ对T47D细胞周期的影响；并检测雌激素受体完全拮抗剂ICI182780对丹参酮Ⅰ影响细胞增殖效应的干预作用,探讨丹参酮Ⅰ的植物雌激素样活性。结果：与溶剂对照组相比,在24h时,雌二醇对细胞增殖有明显刺激作用,并且此作用一直持续到72h。高浓度(10-5mol/L-10-6mol/L)的丹参酮Ⅰ在24h时即表现出对细胞增殖具有显著的抑制作用。而48h时,10-5mol/L-10-8mol/L的丹参酮Ⅰ均表现出对细胞增殖的抑制作用,且10-5mol/L-10-7mol/L的丹参酮Ⅰ对细胞增殖的抑制作用一直持续到72h。从整体上分析,药物浓度高,作用时间增加,药物抑制细胞增殖作用亦强,在一定的程度上体现时间-剂量-效应关系,IC1182780可完全拮抗此作用。丹参酮Ⅰ对人乳腺癌T47D细胞周期的影响：与溶剂对照组相比,48h时雌二醇使T47D细胞的Go/G1期细胞比例明显降低,而S期的细胞比例明显增加。不同浓度的丹参酮Ⅰ均使T47D细胞Go/G1期细胞比例明显升高,而S期的细胞比例明显降低；对G2/M期的细胞比例没有显著的影响。2丹参酮Ⅰ对T47D细胞ER蛋白表达的影响应用Western blotting法观察丹参酮Ⅰ对ERα和ERβ蛋白表达的影响,探讨丹参酮Ⅰ发挥植物雌激素样作用的分子机制。结果：在T47D细胞中,ERα蛋白的表达占优势,而ERβ蛋白为低表达。与溶剂对照组相比,雌二醇和不同浓度丹参酮Ⅰ均可显著诱导T47D细胞ERα和ERβ的蛋白表达水平。3丹参酮Ⅰ对T47D细胞ERα和ERβ mRNA表达的影响采用RT-PCR技术观察丹参酮Ⅰ对ERα和ERβ mRNA表达的影响,在基因水平上进一步探讨丹参酮Ⅰ发挥植物雌激素样作用的分子机制。结果：与溶剂对照组相比,阳性对照雌二醇组可诱导人乳腺癌T47D细胞中ERα和ERβ mRNA表达量的增高；丹参酮Ⅰ亦可诱导T47D细胞中ERα和ERβmRNA表达量的增加。4报告基因方法对丹参酮Ⅰ植物雌激素样作用的研究通过荧光素酶报告基因技术方法探索丹参酮Ⅰ是否通过ERα和ERβ介导发挥植物雌激素样作用。结果：丹参酮Ⅰ可以诱导luc报告基因的转录激活,但是其作用强度明显低于雌二醇。