对虾病毒性疾病的爆发流行能够导致较高的死亡率,其中桃拉综合征病毒感染凡纳滨对虾(Penaeus vannamei)的累积死亡率达到40%～100%,给对虾养殖业造成了严重的损失,影响了对虾养殖业的长期健康稳定的发展。目前检测对虾病毒性疾病的方法,仍然具有耗时长、费用高、实验室要求高等缺点,这需要建立起一种具有快速、便捷、敏感、结果判断直观的检测方法。对虾桃拉综合征病毒(Taura syndrome virus, TSV)能感染对虾引起桃拉综合征(Taura syndrome,TS)。病毒为单链正股RNA病毒,其核衣壳由三个主要结构蛋白VP1, VP2和VP3(55,40和24kD)以及一个次要蛋白VPO (58kD)构成,其中VP1基因是其核衣壳上关键的抗原基因。本文主要根据对虾桃拉综合征病毒核衣壳蛋白VP1是主要的抗原蛋白,利用实验室所保存已构建好的含有VP1保守区基因的菌株,大量诱导表达蛋白做为抗原蛋白,选取5～6周龄雌性Balb/c小鼠,采用皮下免疫的方法免疫小鼠,免疫周期为7d,三次免疫后测得血清效价达到1：10-4,加强免疫三天后,无菌条件下取小鼠脾细胞,在融合剂聚乙二醇的作用下与小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0)杂交,形成杂交瘤细胞,利用间接ELISA的方法,筛选出能够分泌抗体的杂交瘤细胞；杂交瘤细胞经三次亚克隆后得到两株稳定分泌抗体的单克隆细胞株,将此细胞株扩大培养,调整细胞密度为1×106个/mL,接种于9～10周龄Balb/c小鼠腹腔,注射量为1mL/只,每只小鼠接种大约106个细胞,7～10d后抽取腹水,制备出效价达1：10-6的单克隆抗体(McAb),经Western-Blotting验证其具有特异性。利用制备的单克隆抗体,以膜为固相载体制备对虾桃拉综合征病毒胶体金检测试纸条,分别用20nm和30nm的胶体金标记鼠抗pET32a-VP1cr单克隆抗体,选取最优条件,从而建立起一种更快速,简便的检测方法。采用双抗体夹心法,用20nm胶体金标记鼠抗pET32a-VP1cr抗体制成金标抗体结合垫。将鼠抗pET32a-VP1cr抗体喷涂在NC膜组装成了胶体金免疫层析试纸条。阴性对照检测结果成立,检测含有VP1全长的融合蛋白,质控线和检测线显示红色。