卵巢癌的发病率在女性生殖道恶性肿瘤中占第3位，但其死亡率最高。它具有以下特点：(1)缺乏有效的早期诊断手段，2/3病例确诊时已是中晚期；(2)现有的治疗手术(手术+放化疗)对中晚期患者疗效差，预后差，五年生存率长期徘徊在30％，Ⅳ期仅为0-5％；(3)晚期常局限于腹腔，以盆腹腔种植和淋巴转移为主，较少发生远处转移。免疫治疗是近年来肿瘤治疗研究的热点，为卵巢癌的治疗开辟了新的领域。目前卵巢癌的免疫治疗包括局部和系统的细胞因子疗法、预防性和治疗性疫苗、过继性免疫治疗和单克隆抗体疗法等。 白细胞介素18(Interleukin-18,IL-18)是近年发现的新型细胞因子，具有诱生干扰素-γ(interferon-gamma,INF-γ)，增强自然杀伤细胞(natural killer cells，NK)细胞和T细胞毒性淋巴细胞(tumor-specific cytolytic T tymphocytes，CTLs)活性，增强Th1型免疫反应，增强Fas介导的细胞毒作用等多种生物学功能，是一种应用前景较好的抗肿瘤细胞因子。 在神经胶质瘤、骨癌及黑色素瘤的动物模型实验中证明：IL-18能增强Fas介导的细胞毒作用，其抗肿瘤作用可能是通过Fas/FasL介导的肿瘤细胞凋亡来实现的。Fas/FasL是传递细胞凋亡信号的受体、配体对之一。因此，如何实现肿瘤细胞凋亡的调控，是当前肿瘤治疗研究的一个热点。 本实验的目的是：(1)探讨IL-18是否对卵巢癌细胞凋亡有直接诱导作用；(2)探讨Fas/FasL，途径在IL-18诱导卵巢癌细胞凋亡中的作用。 第一部分 IL-18诱发卵巢癌细胞凋亡的研究 材料和方法: 1、荷卵巢癌裸鼠动物模型人卵巢染液性乳头状囊腺癌细胞株(HO-8910)，4-6周龄雌性BALB/cnu/nu裸鼠。将大量培养的HO-8910细胞，调整细胞数为1.08×10<'8>个/ml，用7号针头抽吸，注入裸鼠后项中间皮下，接种细胞浓度为4.5×10<'6>/100μl，建立荷人卵巢染液性乳头状囊腺癌皮下移植瘤模型(约0.5cm大小周径皮下移植瘤、肿瘤切片病理提示为浆液性乳头状囊腺癌)。共24只建模成功的荷卵巢癌裸鼠模型动物纳入研究。 2、分组实验将荷瘤裸鼠随机分为4组，每组6只。种植后7天开始腹腔注射IL-18 100)μl，每天1次，共7天。治疗①组IL-18 0.25μg/100μl，治疗②组IL-18 0.5μg/100μl，治疗③组IL-18 1μg/100μl；对照组为磷酸盐缓冲液(PBS溶液)空白对照。治疗结束后观察2周，处死裸鼠，取皮下移植瘤制成标本。 3、凋亡细胞形态观察每组各取2例部分新鲜标本作电镜观察，观察电镜下细胞凋亡变化并摄像。 4、原位末端标记法(TUNEL)检测凋亡细胞 4组共24例皮下移植瘤标本制成石蜡切片，采用原位末端标记法(TUNEL)检测凋亡细胞。结果判定：凋亡细胞核呈棕褐色，阴性者细胞核呈蓝色。利用HMIAS-2000高清晰度彩色图文分析系统，每张切片选择10个高倍视野，计数每个视野中的肿瘤细胞数，然后再计数其中凋亡细胞的数量，计算凋亡指数。每视野肿瘤细胞数中凋亡细胞所占的百分比，即为凋亡指数(apoptotic indexes，AI)。AI=(凋亡细胞数/肿瘤细胞总数)×100％。 5、统计学分析实验结果均利用SPSS10.0 for Windows统计软件进行相关分析和统计。采用方差检验(检验水平α=0.05)。 结果: 1、透射电镜结果显示：治疗③组卵巢癌细胞多肿胀，细胞膜破碎，胞浆脱落，细胞核裸露；治疗①组和治疗②组卵巢癌细胞呈现较多细胞凋亡样改变：细胞胞浆呈空泡，染色体边集，核仁固缩，胞质呈片状脱落。 2、凋亡指数AI：治疗①组(227.67±66.99)％，治疗②组(522.17±73.44)％，治疗③组(269.67±57.18)％，对照组细胞(7.67±3.35)％。即各治疗组的AI均高于对照组，差异均有显著性(P<0.01)。 第二部分白细胞介素18治疗后卵巢癌细胞表面Fas/FasL表达水平的研究 材料和方法: 1、免疫组化SP法(streptavavidin peroxidase immunohistochemical method)检测癌细胞上Fas/Fasl，将24例标本的石蜡切片常规脱蜡入水，按SP法操作步骤进行操作。参照Birner等报道的方法，每张切片随机检测10个视野(倍数x400)，综合染色强度和阳性细胞占总细胞数的百分比进行半定量处理。Fas和FasL阳性显色为黄色或棕黄色颗粒，主要为胞膜和胞浆着色，染色强度按下列标准评分：着色弱但明显强于阴性对照者为1分，染色清晰者为2分，染色强者为3分；阳性细胞占总细胞数的10％～50％者为2分，51％～80％者为3分，>80％者为4分。上述两项评分相加，不管其染色强度，只要阳性细胞数<10％者为(-)；3分为弱阳性(+)；4～5分为中阳性(++)；6～7分为强阳性(+++)。 2、统计学分析实验结果均利用SPSS10.0 for Windows统计软件进行相关分析和统计。采用等级资料多样本秩和检验(检验水平α=0.05)。 结果: 1、Fas表达对照组癌细胞的Fas呈低表达，治疗组癌细胞的Fas表达增高；治疗三组卵巢癌细胞Fas表达水平分别明显高于对照组，差异有显著性(P<0.05)；治疗②组卵巢癌细胞Fas表达水平最高，明显高于治疗①组和治疗③组，差异有显著性(P<0.05)； 2、FasL表达对照组癌细胞FasL呈高表达，各治疗组屯癌细胞FasL表达下降，与对照组比较均差异均有显著意义(P<0.05)；治疗②组、治疗③组与治疗①组组间比较差异有显著性(P<0.05)； 全文结论： 1、IL-18有诱导卵巢癌细胞凋亡的作用，这可能是IL-18抑制卵巢癌细胞生长的机理之一。 2、IL-18可能通过改变卵巢癌细胞中Fas/FasL水平的表达：上调卵巢癌细胞的Fas的水平，下调卵巢癌细胞的FasL的水平，促进癌细胞凋亡而发挥抗卵巢癌作用。