星型细胞瘤是一种极具侵袭性的恶性神经胶质瘤,目前还没有非常有效的治疗方法。近年来,随着分子生物学的发展及新型抗肿瘤药物的研究,神经胶质瘤的治疗取得了一定的进展。但是,神经胶质瘤的早期诊断还是个尚未解决的难题。为了从分子水平探讨神经系统恶性肿瘤的发生、发展病因,我们建立了星型细胞瘤的cDNA文库,为筛选神经胶质瘤相关基因的研究工作奠定了基础,也有助于神经胶质瘤早期诊断并为它的免疫或基因治疗提供一个研究平台。 本实验通过SMART(Switching Mechanism At 5’end of the RNA Transcript)技术构建了人脑星型胶质细胞瘤cDNA文库:将三例星型细胞瘤组织样本提取总RNA后进行纯化,以纯化得到的mRNA做模板,用M-MLV RTase及SMART引物合成cDNA第一链,然后进行LD-PCR(长距离PCR)扩增cDNA,将扩增后的cDNA片段进行凝胶电泳分析,从胶中分段回收DNA片段,纯化该片段后与pMD18T载体连接,转化E.coli DH5α构建cDNA文库。所构建的文库克隆数为2×10~5,90%克隆为阳性,插入片段大小为200-2500bp。 用本室设计的人类脑脂肪酸结合蛋白(FABP7)引物从文库中进行定向克隆,得到了FABP7基因的全长序列,测序结果与GeneBank中的序列100%吻合,无突变。然后对神经胶质瘤和来自同一病人的癌旁组织进行了FABP7表达含量检测,发现FABP7的表达水平随肿瘤组织恶性程度的升高有降低的趋势。