用于Ends-out技术靶向突变果蝇neuroligin基因工具果蝇的制备

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突触是一种高度特异化的、非对称性的粘附性细胞间连接。通过大量突触将单独的神经元连接在一起,组成功能性神经网络,从而进行信息的整理、储存及提取。神经细胞粘附分子neuroligin可以通过与neurexin介导突触的形成、维持和调节。Neuroligin的突变还会导致多种神经发育异常疾病的发生。 为了进一步在体研究neuroligin基因的功能,了解其在果蝇神经发育中的作用,尝试运用Ends-out方法制备果蝇neuroligin基因突变体。Neuroligin 基因的5′同源臂和3′同源臂经PCR从果蝇基因组中扩增出,并同向插入pW25质粒white基因的两侧得到重组质粒pW25-P1-P2。经过限制性内切酶及DNA测序鉴定表明载体构建成功。利用这一重组质粒,通过果蝇胚胎显微注射制备并得到了3个转基因果蝇品系,并经杂交平衡鉴定后均定位于第三号染色体,为进一步进行定点敲除neuroligin基因奠定了基础。
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