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目的:(1)构建鲍曼不动杆菌(AB)标准菌株ATCC BAA-1605的生物膜模型并测定其生长曲线及生物膜形成曲线。(2)检测抗菌药物美罗培南、头孢哌酮钠、头孢哌酮/舒巴坦钠、舒巴坦及抗菌肽IDR-1018对ATCC BAA-1605菌株的最低抑菌浓度(MIC)。(3)明确IDR-1018联合美罗培南或舒巴坦的抗菌作用。(4)探究美罗培南、舒巴坦及IDR-1018对AB生物膜形成的抑制作用及对已形成生物膜的破坏作用。方法:(1)构建AB生物膜模型并测定其生长曲线及生物膜形成曲线:96孔板中培养AB,每2h取出200μl,于600nm处测量吸光度值,得到AB生长曲线;于聚氯乙烯(PVC)材质的96孔板中培养AB,每24h取出一组(每组3孔),结晶紫染色法观察生物膜,建立AB生物膜模型并得到生物膜形成曲线。(2)微量肉汤稀释法分别检测美罗培南、头孢哌酮钠、头孢哌酮/舒巴坦钠、舒巴坦及抗菌肽IDR-1018对ATCC BAA-1605菌株的最低抑菌浓度(MIC)。(3)微量棋盘稀释法确定IDR-1018联合美罗培南或舒巴坦的抗菌作用。(4)以PVC材料为载体、Luria-Bertani(LB)培养基为液体培养基,将菌液接种于载体上,37℃静置培养,分别于0h及24h予美罗培南、舒巴坦及IDR-1018单独或联合干预24h,结晶紫染色法及激光共聚焦扫描显微镜(CLSM)观察生物膜形态及生物膜内活/死菌数量变化。结果:(1)AB接种至LB液体培养基后,0~4h为生长迟缓期,4h后进入对数生长期,直至14h左右细菌进入稳定生长期;AB于PVC 96孔板中培养至24h即可见低密度紫色膜状物形成,4d左右形成致密稳定的生物膜。(2)MIC:美罗培南64μg/ml、头孢哌酮钠>256μg/ml、头孢哌酮/舒巴坦钠>256μg/ml、舒巴坦32μg/ml及IDR-1018 32μg/ml。(3)部分抑菌浓度指数(FICI):IDR-1018联合美罗培南为1.25,两者联用对AB的联合药敏结果为无关作用;IDR-1018联合舒巴坦为1.5,两者联用对AB的联合药敏结果亦为无关作用。(4)细菌接种0h时予美罗培南、舒巴坦及IDR-1018单独或联合干预24h,浓度为64μg/ml的美罗培南或32μg/ml的舒巴坦只能抑制浮游菌生长,而对生物膜没有明显抑制作用;32μg/ml的IDR-1018抑制浮游菌生长同时可抑制47.8%AB生物膜的形成。16μg/ml的IDR-1018联合美罗培南(16μg/ml)或舒巴坦(8μg/ml)后,可完全抑制生物膜的形成。(5)细菌接种24h后予美罗培南、舒巴坦及IDR-1018单独或联合干预24h,单独应用三种抗菌制剂未见明显生物膜抑制作用,联合应用后,随着IDR-1018浓度逐渐降低,对生物膜状态的AB的抑制作用逐渐减弱。CLSM下可见美罗培南(64μg/ml)或舒巴坦(32μg/ml)单独作用后,生物膜内活/死菌比例较对照组无明显变化,联合IDR-1018(64μg/ml或32μg/ml)后,生物膜内活菌数量明显减少,以死菌为主。结论:(1)以PVC材料为粘附载体可成功构建AB生物膜模型。(2)体外实验证实IDR-1018分别与美罗培南或舒巴坦联用,对AB的联合药敏结果均为无关作用。(3)生物膜是细菌产生耐药性的重要原因,美罗培南及舒巴坦浓度为MIC时,只能抑制浮游菌生长,而对生物膜状态的细菌效果较差。(4)细菌未形成生物膜时,予IDR-1018联合美罗培南或舒巴坦可有效抑制生物膜的形成。(5)生物膜形成初期(24h),予IDR-1018联合美罗培南或舒巴坦可以抑制生物膜的进一步成熟。