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鱼类是人类重要的食物来源,不仅味道鲜美而且营养丰富。新鲜鱼肉中富含15%20%的全价蛋白,1%10%的脂肪,并富含重要的不饱和脂肪酸。我国是水产养殖大国,占世界养殖水产品产量的70%以上,淡水渔业总面积达1760万公顷占国土面积的1.8%。鱼类及其制品含有丰富的营养,同时也是FAO及WHO认定的导致人类过敏的八大类食物之一。其中鱼肉中的小清蛋白（parvalbumin,PV）被视为主要的过敏原,因此开展针对鱼类及其制品中小清蛋白强特异性、高灵敏度的检测具有重要的理论和现实意义。本文研究主要包括小清蛋白单克隆抗体的制备及鉴定、金磁复合纳米微粒的制备以及小清蛋白金磁免疫层析检测方法的建立。具体研究内容如下:1.小清蛋白单克隆抗体的制备以高纯度的PV免疫7只BALB/c小鼠,利用间接ELISA方法测小鼠抗血清效价,获取效价最高的小鼠。取免疫小鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,获得杂交瘤细胞。间接ELISA方法筛选阳性孔,有限稀释法进行3次亚克隆得到分泌同质的杂交瘤细胞株。采用小鼠体内诱生腹水法大量制备单抗。采用辛酸-硫酸铵沉淀法纯化单抗腹水,SDS-PAGE凝胶电泳鉴定单克隆抗体纯度,并采用Western-blotting、考马斯亮蓝染色法分别检测单抗特异性及抗体浓度,结果显示PV单克隆抗体具备良好的特异性,最后通过商业化试剂盒检测PV单抗亚类为IgG1型。2.小清蛋白金磁免疫层析试纸条的定性检测采用一锅法制备氨基化的磁性微粒Fe3O4-PEI,之后在其表面包覆两层Au颗粒,制备金磁（Fe3O4/Au）复合微粒,金磁复合微粒形貌呈圆形,粒径均一,粒径约80nm。金磁复合微粒与小清蛋白单克隆抗体进行偶联,制备金磁免疫探针,并优化了金磁探针的偶联的最佳pH值、抗体用量、反应时间、缓冲液体系等条件。按照试纸条组装方式组装得到小清蛋白金磁探针免疫层析试纸条,并探究样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜的材料选择、处理液最佳配方及最佳处理条件、T/C线最佳划线浓度等试纸条组装条件优化。并进行标准品的检测,结果表明所制备的金磁免疫层析试纸条具有良好的定性功能,可视化检测最低检测浓度为4ng/ml,检测特异性及检测稳定性良好。3.小清蛋白金磁免疫层析试纸条定量检测通过建立T/C比值的定量方法提高金磁金免疫层析试纸条的检测灵敏度;同时结合现实工作的实际情况,从操作简便性、前处理的时间消耗以及回收率等角度比较了7种鱼肉样品前处理方法优缺点。在此基础上建立了金磁免疫层析试纸条T/C比值法定量分析鱼肉中小清蛋白的快速检测方法。