论文部分内容阅读
研究的背景及目的：光气是一种重要的化学物质被广泛的运用于现代工业。作为一种高毒性的化学制品,可以导致急性肺损伤,肺水肿,甚至于死亡。目前基因治疗已经成为一种新型的治疗急性肺损伤的方法。血管生成素1(Ang1)是拯救内皮及维持内皮稳定性方面的决定性因子,其可能的原理是减少内皮的渗出和削弱内皮的炎症。本课题中,我们观察光气吸入引起的急性肺损伤的病理改变,假设Ang1基因治疗能逐渐降低炎症因子导致的肺血管的渗出。方法：1.选取SPF级雄性SD大鼠(180-220g)60只随机分为6组,光气组暴露于浓度为8.33g/m3光气5min造成急性肺损伤模型,空气组则放入相同体积的容器内,吸入5min空气；设空气对照组三组,分别为：空气组,空气+Ad组,空气+Ad/Ang1组；,光气组三组,分别为：光气组,光气+Ad组,光气+Ad/Ang1组。腺病毒在吸入相应气体后1小时,由尾静脉注射干预。2.气体(空气,光气)暴露5min,36小时后,取右肺下叶行湿／干比检测,取部分右肺上叶石蜡固定,HE染色行病理学检查,部分右肺上叶OCT包埋,新鲜冰冻切片观察免疫荧光,取右肺中叶行Western blot检测肺组中Ang1蛋白含量,RT-PCR法检测肺组中Ang1,IL-1β,IL-17和VEGF mRNA含量。3.左肺行肺泡灌洗,取部分肺泡灌洗液行粒细胞计数。ELISA法检测肺水中Ang1, IL-1β, IL-17和VEGF的浓度。4.腹主动脉采血,离心后取血清,ELISA法检测血清中Ang1,IL-1β,IL-17和VEGF的浓度。结果：1.光气暴露组肺组织内及血清中的Ang1是呈下降趋势的。2.通过腺病毒尾静脉注射法可以成功转染动物,且病毒本身对动物无致病性。3.腺病毒所携带的目的基因可以在动物体内得到表达,肺组织中Ang1蛋白水平, mRNA水平以及血清中Angl水平均高于空白腺病毒对照组。4.外源性的Ang1可以一定程度上缓解光气引起的急性肺损伤,如减少了肺泡灌洗液中的粒细胞数,肺湿／干比等。5.Angl可以下调某些炎症因子,如IL-1β,IL-17。结论：1.腺病毒携带Angl目的基因转染动物模型制造成功,且腺病毒本身对动物无明显影响。2.Angl肺内高表达,发挥其抗炎和稳定血管减轻渗漏的作用,腺病毒介导的Angl基因治疗不失为一种可行性的干预光气引起的急性肺损伤的方法。