前言 增殖性糖尿病视网膜病变(PDR)是糖尿病的常见并发症，也是主要致盲眼病之一，其特点是视网膜前新生血管和纤维血管膜的形成。目前，PDR的发病机制还不十分清楚。 PDR的早期表现为选择性视网膜毛细血管周细胞丧失，视网膜内屏障的破坏，随后由于致血管生成因子的产生和细胞外基质(ECM)的合成，引起新生血管的形成。同时，视网膜组织在新生血管附近逐渐发生纤维增殖，最终导致视网膜前增殖膜的形成。近年来，国内外对PDR的发病机制进行了大量的研究，但都主要集中在对致血管形成因子的研究，对ECM在PDR发病机制中所发挥的作用研究较少。 基质金属蛋白酶(MMPs)是一组降解细胞外基质(ECM)的内源性蛋白酶系。MMP-2、MMP-9是MMPs最主要的两个成员，能降解明胶、Ⅳ型胶原、Ⅴ型胶原、Ⅶ型胶原、纤维连接蛋白和弹性蛋白，在ECM降解和组织重建中起非常重要的作用。已有研究表明，MMP-2、MMP-9与肿瘤浸润、肝纤维化以及新生血管形成密切相关。目前，对MMP-2和MMP-9在PDR纤维血管膜形成过程中是否发挥的作用，尚不十分清楚。因此，本研究应用免疫组化方法，检测了PDR增殖膜MMP-2、MMP-9的表达，探讨其表达是否与新生血管形成和纤维化有关，以便进一步明确PDR的发生机制，并为PDR的治疗开辟一个新的方向。 方法 一、标本来源 标本取自19例(24只眼)诊断为PDR的住院患者和18例(18只眼)诊断为PVR的住院患者，均为视网膜前表面增殖膜。手术采用美国STORZ公司的玻璃体切割机，切割中后部玻璃体和积血，用剥膜钩将视网膜表面增殖膜剥离，用玻璃体镊夹出。取出的视网膜增殖膜，立即用4％多聚甲醛固定，石蜡块包埋保存。玻片经多聚赖氨酸防脱片预处理，每个标本做4μm连续切片5张。所有切片先作HE染色，结构完整的增殖膜行免疫组织化学染色。 二、M MP一2、MMP一9检测 免疫组织化学染色采用福州迈新生物技术开发公司提供的试剂盒，按照试剂盒说明书步骤进行染色。实验以死后12小时内，角膜移植取材后的正常成年人尸体眼球的视网膜组织为阴性对照组，以PBS代替特异性第一抗体为自身空白对照。在光镜下观察免疫组化染色切片，MMP一2、MMP-9以背景清晰、细胞胞浆出现棕黄色颗粒为阳性，计算阳性率，反映MMP-2、MMP一9在视网膜增殖膜的定性表达;每张切片在高倍显微镜下(400倍)随机选择5个视野，采用Metamorp丫DP10/Bx51图像分析软件，测量其平均灰度值，反映MMP一2、MMP一9在视网膜增殖膜的半定量表达。对M MP一2、MMP一9的定性表达和定量表达结果分别采用xZ检验和t检验进行统计学分析。结果 一、病理组织切片观察 PDR的视网膜增殖膜中可见新生血管，多位于增殖膜周边部。部分新生血管管腔内可见红细胞和分叶核细胞。增殖膜内还可见到胶原纤维等细胞外基质和不同形态的细胞，根据细胞形态，可见成纤维样细胞、色素上皮细胞及神经胶质细胞。PvR的视网膜增殖膜中亦可见数量不等的色素上皮细胞、成纤维细胞样细胞、神经胶质细胞和巨噬细胞，还可见胶原纤维等细胞外基质。正常视网膜细胞排列整齐，各层结构清晰完整。 二、定性观察 MMP一2、MMP一9棕黄色阳性表达多数存在于细胞胞浆和细胞外基质，阳性细胞呈散在的或聚集分布。PDR增殖膜和PVR增殖膜MMP一2、MMP一9表达阳性细胞主要为色素上皮细胞和成纤维样细胞。PDR增殖膜还可见到血管内皮细胞及其周围基质MMP一9染色阳性。 PDR增殖膜染色阳性率分别是MMp一2为67%，MMP一9为83%。PVR增殖膜染色阳性率分别是MMP一2为72%，MMP一9为61%。正常视网膜标本MMP一2、MMP一9染色阴性。PDR增殖膜MMP一2、MMP一9阳性表达率与PVR增殖膜相比，差别无统计学意义(P>0 .05)。 三、半定量观察 PDR增殖膜MMP一2、MMP一9表达的平均灰度值分别为巧0.64士0·63，149·69土0.78;PVR增殖膜MMP一2、MMP一9表达的平均灰度值分别为150.54士0.44，151.07土0.90。PDR增殖膜与PVR增殖膜相比，MMP一2表达差别无统计学意义(P>0 .05)，MMP一9表达差别具有统计学意义(P<0.001)，PDR增殖膜MMP一9表达高于PvR增殖膜。结论 PDR增殖膜MMP一2和MMP一9表达阳性，二者的表达可能与PDR视网膜纤维增殖膜形成密切相关，PDR新生血管形成可能主要与MMP一9的阳性表达有关，为PDR的发病机制提供了一种新的理论依据。