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本文共分为三个部分,第一部分为,HER2在胃癌辅助放疗中的作用研究,第二部分为吡咯替尼对HER2阳性胃癌细胞放疗敏感性的影响及其机制研究,第三部分为吡咯替尼与化疗药物联合使用的效应研究。第一部分:HER2在胃癌辅助放疗中的作用研究【目的】探索HER2在胃癌放疗中的作用。【方法】依据相关标准纳入2013年1月至2015年6月止,于我院胃肠外科行根治性胃癌手术的患者,回顾性分析本单位胃腺癌HER2阳性率,并分析HER2与患者临床病理特征之间的关系;纳入2013年1月至2017年12月止,于我院胃肠外科行根治性胃癌手术并于我院肿瘤科行标准辅助放疗的患者,定期随访,前瞻性地研究HER2对接受辅助放疗患者预后的影响。【结果】本单位HER2检测率为99.9%,HER2阳性率为8.313%;HER2表达与胃癌患者的淋巴结转移有显著相关性(P=0.042),与患者年龄、性别、肿瘤大小、分化程度、浸润深度及临床分期无显著相关性。在接受辅助放疗的胃癌患者中,HER2阳性患者中位OS为42.83个月(95%CI 0.2123-3.615),HER2阴性患者中位OS为37.53个月(95%CI 0.2767-4.708),两组之间没有显著差异性(P=0.7029)。【结论】术后接受辅助放疗的胃癌患者的OS与HER2状态无显著相关性。第二部分:吡咯替尼对HER2阳性胃癌细胞放疗敏感性的影响及其机制研究【目的】探究吡咯替尼对HER2阳性胃癌细胞放疗敏感性的影响。【方法】本研究使用了两株高表达HER2的细胞株NCI-N87和SKBR3,两株低表达HER2的细胞株MKN28和MCF7。用western blot和免疫荧光法检测各个细胞株的HER2表达情况,CCK-8法检测吡咯替尼对各个细胞株增殖能力的影响。NCI-N87和SKBR3细胞分别接受单纯射线处理和吡咯替尼联合射线处理后,CCK8法检测细胞增殖能力的变化,克隆形成实验检测细胞放疗敏感性的变化,western blot检测PI3K/Akt和MEK/MAPK通路的活化情况及HER2入核情况,流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期分布情况,western blot和免疫荧光法检测细胞DNA损伤的标志物ΓH2AX表达情况。体内实验通过裸鼠移植瘤模型验证吡咯替尼的放疗增敏效应。【结果】吡咯替尼对HER2高表达的细胞增殖抑制作用更明显。放疗联合吡咯替尼处理组的细胞增殖能力抑制率明显大于单纯放疗组(P<0.01)。克隆形成实验证实,吡咯替尼能明显增加NCI-N87及SKBR3的放疗敏感性,SER值分别为1.375和1.326。吡咯替尼联合放疗对裸鼠移植瘤的生长抑制作用较单纯放疗组更为显著。吡咯替尼能有效抑制放疗引起的HER2入核和DNA损伤修复,增加放疗引起的细胞凋亡和G2/M期阻滞。【结论】吡咯替尼能有效提高HER2高表达胃癌细胞的放疗敏感性,其机制可能是抑制放疗引起的HER2入核和DNA损伤的修复,增加放疗引起的细胞凋亡和G2/M期阻滞。本研究为HER2阳性胃癌患者的治疗提供了新的思路。第三部分:吡咯替尼与化疗药物联合使用的效应研究。【目的】研究吡咯替尼与化疗药物联合使用的抗肿瘤效应。【方法】本研究使用了两株高表达HER2的细胞株NCI-N87和SKBR3,使用的化疗药物为5-氟尿嘧啶、顺铂、多西他赛和表柔比星。两株细胞均接受一定浓度梯度的单药化疗药物处理和化疗药物联合吡咯替尼处理。48h后,CCK8法检测细胞增殖能力的变化,比较两组间的差异。NCI-N87和SKBR3细胞的裸鼠移植瘤模型建立后,分为处理组、单药化疗药物处理组、化疗药物联合吡咯替尼处理组和化疗药物联合吡咯替尼和放疗处理组,观察并记录各组肿瘤生长变化。【结果】在NCI-N87细胞中,吡咯替尼联合多西他赛或顺铂对细胞增殖抑制作用显著强于单药多西他赛或单药顺铂(P<0.01);在SKBR3细胞中,吡咯替尼联合多西他赛或5-氟尿嘧啶对细胞增殖抑制作用显著强于单药多西他赛或5-氟尿嘧啶(P<0.01);而吡咯替尼联合多柔比星对两株细胞增殖的抑制作用与单药多柔比星相比无明显差异。动物实验进一步证实,吡咯替尼联合多西他赛的抗肿瘤效应明显强于单药多西他赛(P<0.05);且在胃癌模型中,两药联合放疗对肿瘤的抑制作用更强于两药联合(P<0.05),但在乳腺癌模型中,两药联合放疗与单纯两药联合相比,抗肿瘤作用无明显差异。【结论】吡咯替尼能有效提高多西他赛的抗肿瘤效应,为HER2阳性胃癌患者提供了新的治疗策略。