【摘 要】
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目的:阐明半胱氨酸蛋白酶抑制剂SN（CST1）促进胃癌转移的作用及其机制。方法:（1）首先收集6对无远处转移和5对伴腹膜转移胃癌患者的癌和癌旁组织,进行临床组织标本的转录组测序。对测序结果进行统计学分析,找出显著上调差异基因。（2）另收取75对胃癌患者癌和癌旁组织标本,提取胃癌组织标本中的总蛋白和总RNA,并用Western Blot和qRT-PCR检测CST1的蛋白和mRNA在胃癌和癌旁组织中的
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目的:阐明半胱氨酸蛋白酶抑制剂SN（CST1）促进胃癌转移的作用及其机制。方法:（1）首先收集6对无远处转移和5对伴腹膜转移胃癌患者的癌和癌旁组织,进行临床组织标本的转录组测序。对测序结果进行统计学分析,找出显著上调差异基因。（2）另收取75对胃癌患者癌和癌旁组织标本,提取胃癌组织标本中的总蛋白和总RNA,并用Western Blot和qRT-PCR检测CST1的蛋白和mRNA在胃癌和癌旁组织中的表达。（3）提取 AGS、BGC823、HGC-27、MGC803、MKN45、SGC7901、SNU-1七种胃癌细胞和正常胃黏膜上皮细胞GES-1的总蛋白和总RNA,利用Western Blot和qRT-PCR检测上述细胞中CST1的蛋白和mRNA的表达。（4）在CST1相对低表达的胃癌细胞HGC-27和CST1相对高表达的胃癌细胞MKN45中,分别转染慢病毒,构建 HGC-27 过表达 CST1 细胞株 HGC-27-CST1 及其对照 HGC-27-mock,MKN45敲减 CST1 细胞株 MKN45-shCST1-2、MKN45-shCST1-3 及其对照 MKN45-shcontrol,并利用荧光显微镜观察其转基因效率,利用Western Blot检测CST1的过表达与敲减效率。（5）用细胞功能学实验,如CCK-8细胞增殖实验、平板细胞克隆形成实验、细胞划痕实验、Transwell迁移和Transwell侵袭实验来研究CST1对胃癌细胞生长、增殖和迁移、侵袭能力的影响。（6）用Western Blot检测CST1过表达胃癌细胞株HGC-27-CST1 及其对照 HGC-27-mock 和 CST1 敲减胃癌细胞株 MKN45-shCST1-2、MKN45-shCST1-3及其对照MKN45-shcontrol中EMT信号通路相关蛋白的表达。结果:（1）筛选出显著上调差异基因CST1,相较于癌旁组织,胃癌组织中的CST1表达明显增高。（2）与胃黏膜正常上皮细胞GES-1相比,CST1在胃癌细胞系中表达上调,且HGC-27和SNU-1的CST1表达相对较低,AGS和MKN45的CST1表达相对较高。同时成功构建了 HGC-27过表达CST1、MKN45敲减CST1稳株细胞系。（3）过表达或者敲减CST1没有明显改变胃癌细胞的增殖能力,但是可以促进胃癌细胞的迁移和侵袭。（4）CST1可能通过激活EMT信号通路促进胃癌细胞的转移能力。结论:CST1在胃癌中表达升高且可能通过激活EMT促进胃癌的转移。
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