【摘 要】
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聚苹果酸(Poly malic acid,PMLA)是以苹果酸为单体通过酯键连接形成的高分子聚合物。聚苹果酸独特的性质结构赋予其在生物医药领域、食品领域、化妆品领域广泛的应用前景。通
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聚苹果酸(Poly malic acid,PMLA)是以苹果酸为单体通过酯键连接形成的高分子聚合物。聚苹果酸独特的性质结构赋予其在生物医药领域、食品领域、化妆品领域广泛的应用前景。通过生物发酵法生产聚苹果酸全部为β型,其单体全部为L-苹果酸,应用范围更广,更加适合用于制作各种生物材料。短梗霉(Aureobasidium spp.)是主要的聚苹果酸产生菌,本文从自然界中分离筛选短梗霉菌株,应用分子生物学方法对菌株进行鉴定,构建系统发育进化树。对出芽短梗霉ipe-1菌株发酵生产聚苹果酸的主要代谢途径进行研究。本论文的主要研究结果如下:(1)经亚甲基蓝培养基初筛共获得18株野生菌落,经摇瓶复筛,获得产聚苹果酸的菌株2株,分别命名为ipe-3、ipe-5。经分子生物学鉴定,ipe-3为出芽短梗霉(Aureobasidium pullulans),ipe-5为短梗霉。并将ipe-3、ipe-5的ITS序列提交到GenBank。ipe-5为首次发现的短梗霉新菌种,与GenBank数据库中ITS序列同源性为96%。(2)对ipe-3、ipe-5菌株进行了发酵性能测定,ipe-3聚苹果酸产量为10.027g/L,苹果酸产量为5.70 g/L,ipe-5聚苹果酸产量为0.3g/L,苹果酸产量最高为57.24 g/L。ipe-5能够高产苹果酸,具有发酵时间短,生产强度高的特点,苹果酸生产强度可达1.19 g/L·h。(3)溶氧对聚苹果酸发酵的结果表明,溶氧浓度由70%降低到10%时,ipe-3的主要发酵产物聚苹果酸产量降低41.67%,ipe-5主要发酵产物苹果酸产量降低83.05%,ipe-1的主要发酵产物聚苹果酸产量降低54.44%。(4)通过酶活分析发现,ipe-1糖代谢途径有磷酸戊糖途径、糖酵解途径、TCA循环,其中磷酸戊糖途径对聚苹果酸合成起重要作用。通过代谢调控,发现聚苹果酸主要通过磷酸烯醇式丙酮酸羧化途径产生且合成过程需要ATP的参与。
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