论文部分内容阅读
高效液相色谱法（HPLC）是目前测定γ-氨基丁酸（GABA）含量最为常用的方法,但是,现有HPLC法存在流动相配比过于繁杂、流速较高、系统压力较大、分析所需周期时间久等缺点,因此,本研究以红枣为研究对象,首先,对丹酰氯（Dansyl-CI）柱前衍生HPLC法、2,4-二硝基氯苯（FDCB）柱前衍生HPLC法、2,4-二硝基氟苯（FDNB）柱前衍生HPLC法和异硫氰酸苯酯（PITC）柱前衍生HPLC法4种方法进行优化和建立;然后,分别对10类不同品种的鲜枣和4种红枣产品进行GABA含量测定;最后,对四种优化后的GABA含量测定方法进行对比分析。获得如下结论:1、丹酰氯法测定红枣GABA的方法优化及建立通过研究得出:甲醇（A）和0.5%甲酸（B）为流动相,洗脱梯度:0-15min,60%-80%（A）;15-16min,80-100%（A）;16-20min,100%（A）;20-21min,100-60%（A）;21-25min,60%（A）;流速0.7m L/min。优化后的色谱条件具有基线平稳、分离度高、系统压力小且分析周期短等优点。在该分析条件下,方法具有线性好、检出限和定量限低、精密性和回收率高等特点。2、2,4-二硝基氯苯法测定红枣GABA的方法优化及建立采用与丹酰氯柱前衍生法相同的HPLC条件,对衍生条件进行优化,研究得出:衍生温度90℃;衍生时间1h;硼酸钠浓度0.01mol/L;衍生剂添加量取3m L。该方法具有线性好、检出限和定量限低、精密性和回收率高的特点。3、2,4-二硝基氟苯法测定红枣GABA的方法优化及建立采用与丹酰氯柱前衍生法相同的HPLC条件,对衍生条件进行优化,研究得出:衍生温度60℃;衍生时间45min;衍生剂添加量取1m L。该方法具有线性好、检出限和定量限低、重现性和回收率高的特点。试用于大批量红枣样品中GABA的定量分析。4、异硫氰酸苯酯法测定红枣GABA的方法优化及建立通过研究得出:流速0.7m L/min;柱温30℃;进样体积10μL;甲醇（A）和0.1 mol/L乙酸钠水溶液（p H=6.5,含0.5%三乙胺）（B）为流动相;洗脱梯度:0-15min,40%-60%（A）;15-16min,60-100%（A）;16-20min,100%（A）;20-21min,100-40%（A）;21-30min,40%（A）;检测波长252nm。该方法具有线性好、检出限和定量限低、重现性和回收率高的特点。5、红枣样品中GABA的测定分析了10个鲜枣样品及4个红枣产品中的GABA含量,10个鲜枣样品的GABA含量在127.44-327.37μg/g DW范围内,其中鲜骏枣的GABA含量最高,而鲜酸枣的GABA含量最低。通过对4个红枣产品中GABA进行测定,干制骏枣GABA含量最高,超过500μg/g DW,但是枣汁、枣酱和枣泥等产品GABA含量比干制骏枣低得多。通过对Dansyl-Cl、FDCB、FDNB和PITC法的比较,发现四种方法测定的结果间无统计学显著差异（p>0.05）,说明均能用于批量红枣样品的GABA含量测定。但从衍生温度、衍生步骤、试剂价格等因素考虑,Dansyl-Cl和FDNB两种方法是较为理想的批量红枣样品中GABA的测定方法。