红细胞膜CD44s对免疫黏附胃癌细胞作用的研究

来源 :中国医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:durrenchen
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目的CD44是属于黏附因子家族的跨膜糖蛋白,红细胞表面表达的CD44为标准型CD44(standard isoform of CD44,CD44s),为红细胞上表达最多的免疫分子。CD44s是大分子多糖透明质酸(hyaluronic acid,HA)的主要受体,HA在肿瘤细胞可见表达。研究表明肿瘤患者红细胞免疫黏附肿瘤细胞的能力显著下降,而红细胞表面CD44s的表达量也明显降低。由此我们设想红细胞表面的CD44s与肿瘤细胞表面的HA之间以受体和配体的结合方式在红细胞黏附肿瘤细胞过程中可能起到一定的作用。本研究对体外培养的胃癌细胞表面HA及正常人和胃癌患者红细胞表面CD44s的表达情况进行测定,以证实胃癌细胞表面HA表达与否,以及胃癌患者红细胞表面CD44s表达量是否减弱;并通过鼠抗人CD44s单克隆抗体阻断红细胞膜CD44s,观察阻断前后胃癌细胞红细胞花环形成情况,以此探讨红细胞表面CD44s在免疫黏附血行转移的胃癌细胞中的作用。材料与方法1、药品与试剂鼠抗人CD44s单克隆抗体(Mouse Anti-Human CD44s monoclonal antibody)、PE标记的鼠抗人CD44s单克隆抗体(PE labeled mouse anti-human CD44s monoclonalantibody)购自美国BD公司;生物素化的透明质酸结合蛋白(BiotinylatedHyaluronic Acid Binding Protein)、辣根过氧化物酶标记的生物素结合蛋白(Horseradish peroxidase labeled biotin-binding protein)、DAB显色试剂盒均购自上海森雄科技。2、仪器和设备生物安全柜(上海振梓创有限公司)、CO2培养箱(德国Memmert公司)、倒置显微镜(日本Olympus公司)、流式细胞分析仪(美国BD公司)。3、红细胞和胃癌细胞悬液制备人胃癌细胞株MGC-803(中国医科大学发育生物学教研室馈赠)经培养、扩增后制备成浓度为1×106/ml的细胞悬液、爬片细胞备用。取健康年轻人和胃癌患者静脉血经洗涤后分别制成浓度为1×108/ml、1×106/ml的红细胞悬液备用。4、检测指标及方法通过流式细胞术分析红细胞表面CD44s的表达情况;采用免疫细胞化学方法检测胃癌细胞(MGC-803)表面是否表达HA;利用胃癌细胞红细胞花环(R-Trosette)形成率来评价阻断红细胞表面CD44s前后红细胞黏附胃癌细胞能力的变化。结果1、流式细胞术分析结果经流式细胞仪分析正常人红细胞表面有CD44s表达,平均荧光强度为308.694±8.643。胃癌患者红细胞表面CD44s的表达明显减弱,平均荧光强度为201.714±5.324。2、免疫细胞化学分析结果通过对爬片的胃癌细胞进行免疫细胞化学分析,证实了胃癌细胞表面有HA的表达。对10份胃癌细胞爬片样本进行分析,其平均积分光密度(IOD)值为4617±1775.363。3、胃癌细胞-红细胞花环形成率结果通过胃癌细胞-红细胞花环形成率来评价阻断红细胞表面CD44s前后红细胞免疫黏附胃癌细胞能力的变化,实验结果显示阻断红细胞表面CD44s以后红细胞黏附胃癌细胞的能力显著下降。阻断后花环形成率为20.6±9.232,显著低于阻断前的45.6±7.569(P<0.05)。结论1、胃癌细胞膜有HA表达。2、胃癌患者红细胞表面CD44s表达量显著低于正常人。3、红细胞CD44s通过与胃癌细胞HA的结合作用而发挥对胃癌细胞的免疫粘附作用,且此作用不依赖于补体。
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