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Kazal型蛋白酶抑制剂广泛存在于生物体内，对机体的发育和免疫应答等生理过程发挥极其重要的作用。该类抑制剂一般由一个或多个Kazal型结构域组成，并且每个结构域具有保守的序列结构特征和三维构像，通常认为每个结构域均能形成三对链内二硫键且其抑制专一性取决于P1活性位点。本实验室从中期蚕蛹中成功克隆到一个全长为1036 bp的基因序列(BmSPI)，该序列为首次报道，在GenBank的登录号为：DN236893，其ORF框为933 bp，编码310个氨基酸。将该推测的氨基酸序列进行同源性(BlastP)比对，发现该蛋白具有三个保守的Kazal型结构域(C-X<,3>-C-X<,9>-C-X<,6>-Y-X<,7>-C-X<,3>-C-X<,11>-C)和三个不同的P1活性位点：苏氨酸(T)、丙氨酸(A)、谷氨酰氨(Q)，通过SignalP3.0分析发现该蛋白N末端不存在信号肽。通过PCR扩增目的基因完整的ORF框，经过BamHI和XhoI双酶切，将该基因重组到GST融合表达载体pGEX-5X-1后转化TG1中质粒扩增，再转化到BL21(DE3)star中进行表达分析。通过GST亲和层析，得到较纯的融合目的蛋白GST-BmSPI，Factor Xa因子将融合蛋白中的GST切除后，再通过反相快速液相色谱(RP-FPLC)进一步纯化，质谱鉴定该蛋白的分子量为33.642 kDa。对Thrombin、Subtilisin A、Chrymotrypsin体外酶抑制试验表明BmSPI对Subtilisin有强烈的抑制作用，进一步研究表明该蛋白与Subtilisin能形成摩尔比例为1：1的复合体且其抑制常数为3.35 nM。将经过RP-FPLC纯化的BmSPI作为抗原免疫新西兰兔制备多克隆抗体，ELISA检测该抗血清的效价达到1：106000以上。将爬片的Bm5细胞进行细胞免疫实验，发现BmSPI表达在细胞质中，而细胞核中几乎没有。取五龄家蚕做横切冷冻切片，用Cy3标记的羊抗兔二抗做免疫组织定位，发现该蛋白几乎遍及各组织中，特别是表皮中含量最高。提取五龄蚕的各个组织和各个时期(卵，幼虫，蛹，蛾)的总RNA，进一步用荧光相对定量PCR检测表明BmSPI在表皮中表达量最高，脂肪体中表达量最低，在幼虫期中表达量最高，在卵期表达量最低。将制备的双链RNA经脂质体转染家蚕Bm5细胞，干扰后进行PI染色，用流式细胞仪检测细胞凋亡情况，发现干扰组与对照组的细胞没有显著差异，没有引起细胞凋亡。