第一部分HA/CD44激活Anx A1/Akt/m TOR通路促进Th1分化影响慢性非细菌性前列腺炎发生的作用与机制研究背景:慢性非细菌性前列腺炎（chronic nonbacterial prostatitis,CNP）是一类好发于中青年男性的泌尿生殖系统疾病,其治愈率低、复发率高且发病机制不清导致临床治疗效果不佳。大量研究表明免疫失调在CNP的发生发展中发挥着重要作用。CD44（淋巴和非淋巴细胞表面均有表达的膜蛋白）参与了机体多种正常/异常的生理过程,如淋巴细胞的归巢、活化和增殖,众多研究表明CD44在多种炎性疾病的发生与发展中发挥了重要作用,但是,CD44在CNP发病机制中的作用鲜有报道。方法:首先,通过向小鼠皮下注射前列腺抗原和弗氏完全佐剂混合物的方法建立实验性自身免疫性前列腺炎（experimental autoimmune prostatitis,EAP）小鼠模型。收集CNP患者外周血的淋巴细胞和EAP小鼠的前列腺组织进行测序和分析以寻找潜在的关键作用分子。其次,基于EAP小鼠模型,应用sh CD44-腺相关病毒和4-甲基伞形酮（4-Methylumbelliferone,4-MU）抑制小鼠体内CD44和透明质酸（hyaluronan,HA）的表达以探讨CD44和HA对EAP的影响。最后,应用免疫共沉淀、银染、质谱分析和体外试验进一步探讨HA/CD44影响EAP发生发展的潜在调控分子信号通路。结果:应用免疫组化、测序分析等方法发现CD44是CNP的关键作用分子,且CD44在浸润至EAP小鼠前列腺组织的炎性细胞中明显高表达,而在上皮细胞中呈低表达状态。抑制CD44或HA表达可明显缓解EAP小鼠的前列腺组织炎症。体外实验发现HA/CD44可促进Th1细胞的分化,经免疫共沉淀、质谱分析等发现HA与CD44结合后能够促进CD44与膜联蛋白A1（annexin A1,ANX A1）的相互作用并维持了细胞内Akt/m TOR通路的激活状态,抑制初始CD4+T细胞内ANX A1的表达后,可显著降低Th1细胞的分化比例和p-Akt和p-m TOR的表达水平。这些结果表明HA/CD44轴可通过促进ANX A1的表达激活Akt/m TOR通路从而促进Th1细胞的分化。结论:本研究系统地探讨了HA/CD44在CNP中的生物学作用,发现HA/CD44促进Th1细胞分化在CNP发生发展中起着重要作用。靶向HA/CD44/ANX A1/Akt/m TOR信号可能是CNP患者新的潜在治疗策略。第二部分褪黑素介导Sirt1通路调控NLRP3炎症小体缓解慢性非细菌性前列腺炎的机制研究背景:慢性非细菌性前列腺炎（chronic nonbacterial prostatitis,CNP）是一类好发于中青年男性的泌尿生殖系统疾病。褪黑素作为一种神经内分泌激素,具有多种生物学功能,其通过沉默信息调节因子（Sirtuin 1,Sirt1）和NLRP3炎症小体信号通路在抗炎方面的作用备受关注。基于实验性自身免疫性前列腺炎（experimental autoimmune prostatitis,EAP）小鼠模型,本研究探讨了褪黑素对CNP的影响及潜在机制。方法:通过蛋白印迹和免疫组织化学染色方法检测EAP小鼠前列腺组织中Sirt1和NLRP3炎症小体相关蛋白的表达水平,探讨褪黑素与其之间的调控关系,明确褪黑素在CNP中抗炎作用的关键分子机制。结果:与对照组鼠相比,EAP小鼠前列腺组织表现出严重的弥漫性炎性细胞浸润和盆腔疼痛。褪黑素治疗后显著降低了EAP小鼠前列腺组织中炎性细胞浸润、盆腔疼痛和炎性细胞因子的表达水平,这与褪黑素激活Sirt1通路和抑制NLRP3炎症小体激活有着密切关联。结论:褪黑素通过激活Sirt1通路抑制NLRP3炎症小体激活从而减轻前列腺炎症和盆腔疼痛,这为CNP的治疗提供了一种新的策略。