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目的:本研究分析食管癌相关自身抗原CK13、CK16、CaD、ACTG2在食管癌四种证候中的表达分布规律,进而探讨清热化痰方及其清热和化痰两个拆方对食管癌细胞增殖及其相关自身抗原表达的调节作用,为食管癌证候的分子病机和临床用药提供依据。方法:1.用食管癌自身抗原抗体和病人自身血清对食管癌组织进行western blot分析比较;2.运用免疫组化法分析CK13、CK16、CaD、ACTG2在四种证候食管癌正常组织、癌旁组织和癌组织中的表达;3.运用MTT法检测清热化痰方及其清热和化痰两个拆方对食管癌细胞EC109、EC9706和TE-1细胞增殖活性的影响;4.运用流式细胞术分析清热化痰方及其清热和化痰两个拆方对食管癌细胞EC109、EC9706和TE-1细胞周期的影响;5.运用western blot分析清热化痰方及其清热和化痰两个拆方对食管癌细胞EC109、EC9706和TE-1 CK13、CK16、CaD、ACTG2表达的影响。结果:1.痰气交阻证、瘀血内结证、津亏热结证和气虚阳微证食管癌病人的发病年龄不同,痰气交阻证病人发病年龄为60.6±8.1岁,瘀血内结证病人发病年龄为61.5±11.6岁,津亏热结证病人发病年龄为65.6±8.1岁,气虚阳微证病人发病年龄为68.4±7.3岁。2.痰气交阻证、瘀血内结证、津亏热结证和气虚阳微证组织中分别有自身抗原CK13、CaD、ACTG2和CK16的表达,抗原自身抗体可以用于检测食管癌组织自身抗原表达;3.CaD在食管癌病人癌组织中表达阳性率和阳性表达水平高于正常组织和癌旁组织,其癌旁组织中表达阳性率和阳性表达水平高于正常组织,CaD在食管癌病人正常组织、癌旁组织、癌组织中表达阳性率分别为50.9%、62.2%、72.8%,阳性表达水平分别为0.0085±0.0048、0.0107±0.0056、0.0177±0.0103;CK16、ACTG2在癌组织中的阳性表达水平高于正常组织和癌旁组织,癌旁组织中阳性表达水平高于正常组织,CK16在食管癌病人正常组织、癌旁组织、癌组织中阳性表达水平分别为0.0076±0.0033、0.0158±0.0065、0.0356±0.0165,ACTG2在食管癌病人正常组织、癌旁组织、癌组织中阳性表达水平分别为0.0091±0.0039、0.0136±0.0043、0.0214±0.0110;CK13在癌组织中的阳性表达水平低于正常组织和癌旁组织,癌旁组织中阳性表达表达水平低于正常组织,CK13在食管癌病人正常组织、癌旁组织、癌组织中阳性表达水平分别为0.2053±0.0311、0.1633±0.0280、0.0412±0.0239;4.食管癌病人癌组织CK13、CK16、CaD、ACTG2的表达在四种证候之间存在差异:瘀血内结证CaD阳性率为100%(6/6),其阳性表达水平为0.0364±0.0051,高于痰气交阻证(29/34,0.0168±0.0088)、津亏热结证(5/8,0.0159±0.0045)和气虚阳微证(5/7,0.0166±0.0089);津亏热结证ACTG2阳性表达水平为0.0346±0.0100,高于痰气交阻证0.0201±0.0106、瘀血内结证0.0244±0.0043和气虚阳微证0.0235±0.0077;气虚阳微证CK16阳性表达水平为0.0595±0.0131,明显高于痰气交阻证0.0325±0.0167、瘀血内结证0.0227±0.0154、津亏热结证0.0393±0.0068;气虚阳微证CK13阳性表达水平为0.0174±0.0058,低于痰气交阻证0.0452±0.0292、瘀血内结证0.0385±0.0209和津亏热结证0.0330±0.0251;CK13、CK16、CaD、ACTG2在食管癌病人正常组织和癌旁组织中表达的证候之间无差异;5.清热化痰方及其清热和化痰两个拆方对食管癌细胞EC109、EC9706和TE-1的增殖均存在抑制作用,抑制作用从强到弱依次为全方组、清热组、化痰组;6.清热化痰方及其清热和化痰两个拆方对食管癌细胞EC109、EC9706和TE-1细胞周期均有影响:与空白对照组比较,EC109、TE-1细胞的清热组、化痰组和全方组S期细胞均减少,其中化痰组变化最明显;EC9706细胞清热组S期细胞增加明显,G2期细胞减少明显,化痰组G1期细胞减少明显,G2期细胞增加明显,全方组G1期细胞增加明显,G2期细胞减少明显。7.清热化痰方及其清热和化痰两个拆方可以不同程度地调节食管癌细胞EC109、EC9706和TE-1中CK13、CK16、CaD、ACTG2表达,用药组CK13表达高于空白组,用药组CK16、CaD、ACTG2表达低于空白组。结论:1.食管癌病人癌组织均表达有自身抗原CK13、CK16、CaD、ACTG2,其中CK16、CaD、ACTG2在食管癌病变过程中表达上升,CK13表达下降;2.在食管癌不同证候病变过程中CK13、CK16、CaD、ACTG2均有改变,其中痰气交阻证CK13表达改变突出,瘀血内结证CaD表达改变突出,津亏热结证ACTG2表达改变突出,气虚阳微证CK16表达改变突出;3.清热化痰方及其清热和化痰两个拆方对食管癌细胞Eca109、EC9706、TE-1增殖的抑制作用存在剂量依赖和时间依赖关系;4.清热化痰方及其清热和化痰两个拆方对食管癌细胞Eca109、EC9706、TE-1的细胞周期有影响,其中Eca109、TE-1细胞各药物组主要作用于S期,EC9706主要作用于S期和G2期;5.清热化痰方及其清热和化痰两个拆方抑制食管癌细胞Eca109、EC9706和TE-1增殖与调节CK13、CK16、CaD、ACTG2蛋白表达相关为清热化痰方治疗食管癌提供了分子依据;6.食管癌痰阻、瘀结、津亏、气虚病机与自身抗原CK13、CK16、CaD、ACTG2表达改变相关。