论文部分内容阅读
目的：现阶段脓毒症广泛存在,对患者危害极大,耗费大量医疗资源,而目前治疗缺乏特异手段,需要进一步扩展对策,同时重症脓毒症及脓毒症休克常伴发SIRS及MODS,心脏功能受损首当其冲。目前脓毒症治疗普遍采用全身抗生素合并局部感染灶清除术,如并发脓毒症后心功能不全,多为对症处理,效果欠佳,尚无特效药出现。脓毒症后心肌功能不全(脓毒症心肌病)机制尚未完全阐明,但一致认为与人体过度激活的自身免疫反应相关。围绕脓毒症后心肌局部及全身炎症反应通路的研究很多,但这些通路亦在机体正常免疫反应中相互交织,维系重要作用,目前研究水平尚难以精确区分生理及病理时各因子所发挥作用,强行对炎症通路进行调控最终结果如何尚需进一步研究,指导临床尚未成熟。本实验旨在明确腹腔注射LPS所致脓毒症模型中的Toll样受体4(TLR4)及其下游的核转录因子(NF-kB)的变化情况,同时测定肿瘤坏死因子α,N末端前体脑纳肽及心功能的变化情况,为指导临床用药提供初步理论依据。方法：1.脓毒症大鼠心肌模型的建立：采用腹腔注射脂多糖(LPS)方法制作大鼠脓毒症心肌模型,腹腔注射LPS10mg/Kg体重,使用无菌盐水配平至5mL注射。实验分组：30只雄性SD大鼠,体重300-350g,随机分组,其中对照组10只,LPS24h组及LPS72h组各10只。分别于注射药物后24h及72h处死实验鼠大鼠,同期处死对照组大鼠各5只。2.腹腔注药后24h,72h右颈总动脉插管至左心室,RM6240BD多功能生理记录仪测定平均血压(M AP)、左室收缩末期压力(LVESP)、左室压力上升及下降最大变化速率(±dp/dtmax)等心功能指标。3.处死大鼠,留取心肌组织,HE染色观测各组心肌细胞变化情况：分别提取心肌组织RNA及胞浆、胞核蛋白,RT-PCR及Western Blot法测定TLR4表达,Western Blot法测定NF-kB蛋白的表达,ELISA法检测各组大鼠心肌TNF-α及血清中NT-proBNP含量。结果：1.腹腔注射LPS 1 Omg／Kg24h后,大鼠出现倦怠懒动,体毛竖立,粪便稀烂,口鼻周及眼轮出血征象,解剖可见体内脏器多发充血糜烂；LPS72h组大鼠上述症状均明显好转或消失。2.与对照组比较,大鼠LPS注射24h表现为LVESP.+dp/dtmax及-dp/dtmax均显著降低,至72h恢复正常水平。(表1,P<0.05)。3.光镜下,对照组大鼠心肌着色均匀完整,未见炎性细胞浸润。LPS24h组心肌损伤明显加重。72h组心肌损伤减轻(图1 HE染色×400)。4.与对照组相比,LPS24h组TLR4mRNA表达显著升高(p<0.05),72h后渐恢复正常,与对照组无统计学差异。5.与对照组相比,LPS24h组心肌组织TLR4及NF-κB p65蛋白显著升高(p<0.05),而LPS72h组心肌组织TLR4及NF一κB p65蛋白表达较对照组无统计学差异。6.与对照组比较,LPS24h组心肌组织NT-proBNP.TNF-α含量升高,而LPS72h组心肌组织TNF-α已恢复至正常,NT-proBNP含量较24h组也明显下降,但仍高于对照组,提示仍有后续心肌损伤(P<0.05)结论：1.腹腔注射LPS(10mg/Kg)可以诱发产生脓毒症模型,可造成明显心肌及功能损害。2.模型中大鼠心肌TLR4／NF-kB通路过度激活,参与脓毒症大鼠模型心肌细胞和功能的损害。