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非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin’s lymphoma,NHL)是一组异质性疾病,它包括多种形态特征、免疫表型、生物学行为、治疗反应和预后不同的类型。NHL是常见的淋巴系统恶性肿瘤,在世界范围内,NHL发病率逐年上升。DNA甲基化是高等真核生物中经常发生的现象,这种表观遗传学改变常发生在基因的启动子区域,并且不改变DNA序列和遗传密码,具有可逆性,在基因转录调控中发挥重要作用。随着对DNA甲基化分子机制的进一步认识,最近的研究表明,肿瘤相关基因甲基化不但在肿瘤的形成过程中起重要作用,而且有可能成为肿瘤早期诊断的分子生物学指标和肿瘤基因治疗的靶点之一。分化抑制因子(inhibitors of differentiation,Id),又称DNA结合抑制因子(inhibitors of DNA binding),属于螺旋-环-螺旋(HLH)转录因子家族成员之一,对碱性HLH转录因子活性起负调节作用。Id4作为Id家族成员之一,其基因表达分布广泛且表达具有组织特异性。研究发现Id4抑制胃癌、乳腺癌、前列腺癌等肿瘤的进展,或抑制肿瘤局部淋巴结的转移,且Id4基因在白血病细胞中的过表达具有明确的抗白血病作用,在骨髓检查正常的NHL患者中检出Id4基因甲基化可能提示淋巴瘤骨髓微量受累。NHL中Id4蛋白的表达情况如何国内外未见报道,本研究采用免疫组织化学与甲基化特异性PCR的方法,研究在非霍奇金淋巴瘤和淋巴组织反应性增生(reactive hyperplasia,RH)中Id4启动子甲基化状态及Id4、Ki-67的表达与相关性,探讨Id4在NHL发生中的作用,为NHL的基因诊断提供理论基础。材料与方法1.70例结内及结外NHL标本来自郑州大学第一附属医院病理科2006-2008年期间存档的石蜡包埋组织标本,并整理其临床病理资料。所有病例经两位病理专家重新阅片。另取同期保存的10例淋巴组织反应性增生作为对照。2.应用免疫组织化学SP法,检测70例非霍奇金淋巴瘤和10例淋巴组织反应性增生中Id4、Ki-67的表达。3.从免疫组化标本中选择了资料完整的40例(淋巴组织反应性增生6例,非霍奇金淋巴瘤34例)。从石蜡包埋组织提取DNA,应用甲基化特异性聚合酶链反应(MS-PCR)技术进行Id4基因启动子区的甲基化状态分析。4.应用统计分析软件SPSS10.0进行χ~2检验和Fisher确切概率法分析。变量间关联程度以Pearson列联系数表示。检验水准取a=0.05。结果1.Id4在NHL中的表达率为35.7%(25/70),而在RH中的表达率为70.0%(7/10),其差异有统计学意义(P＜0.05)。Id4在惰性NHL的表达率为23.1%(3/13),而在侵袭性NHL中的表达率为38.6%(22/57),两者之间的表达差别无统计学意义(P＞0.05)。Id4的表达与患者性别、年龄、免疫分型及肿瘤原发部位等因素无明显相关(P＞0.05)。2.NHL组织中Ki-67的表达率为75.7%(53/70),明显高于RH中表达率10.0%(1/10),其差异有统计学意义(P＜0.05)。侵袭性淋巴瘤Ki-67阳性表达率明显高于惰性淋巴瘤,两者之间的表达差别有统计学意义(P＜0.05)。Ki-67的表达与患者性别、年龄、免疫分型及肿瘤原发部位等因素无明显相关(P＞0.05)。3.24例Id4阳性表达者中Ki-67表达阳性8例(33.3%),46例Id4阴性表达者中Ki-67表达阴性1例(2.2%),经相关分析,r=-0.714,P＜0.05,说明在非霍奇金淋巴瘤患者中Id4蛋白表达与Ki-67蛋白表达呈负相关。5.34例NHL中有15例甲基化,甲基化率为44.1%;6例RH组织均未见甲基化,两者之间的差别有统计学意义(P＜0.05)。Id4在惰性NHL的甲基化率为37.5%(3/8),而在侵袭性NHL中的甲基化率为46.2%(12/26),两者之间的差别无统计学意义(P＞0.05)。6.15例Id4基因启动子甲基化NHL组织中Id4阳性表达1例(6.7%),19例Id4基因启动子非甲基化NHL组织中Id4阳性表达12例(63.2%),经相关分析,r=-0.557,P＜0.05,说明在非霍奇金淋巴瘤患者中Id4基因启动子甲基化与Id4蛋白表达呈负相关。结论1.Id4蛋白在不同类型、不同发病部位的NHL组织中呈均一性表达,说明Id4在不同类型NHL的发生中均起一定作用。2.非霍奇金淋巴瘤患者中Id4启动子甲基化与Id4蛋白的表达呈负相关,提示启动子甲基化可能是Id4表达调控的主要方式,检测Id4启动子甲基化可能对非霍奇金淋巴瘤的辅助诊断有一定意义。3.在非霍奇金淋巴瘤患者中Id4蛋白表达与Ki-67蛋白表达呈负相关,提示Id4蛋白的低表达促进细胞增殖,二者相互协调、共同参与非霍奇金淋巴瘤的发生,联合检测这两种蛋白可能对非霍奇金淋巴瘤的辅助诊断有一定意义。