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目的:采用不同浓度的龙葵碱(Solanine)作用人胰腺癌细胞Panc-1,从细胞形态结构、抑制率及凋亡率来研究龙葵碱对人胰腺癌细胞Panc-1的凋亡诱导作用。并通过检测不同浓度龙葵碱作用Panc-1细胞后P53、Bcl-2和Bax的变化,探讨龙葵碱诱导Panc-1细胞凋亡与P53、Bcl-2和Bax的表达的关系,以及在龙葵碱诱导细Panc-1胞凋亡机制中的作用。
方法:通过倒置显微镜拍照观察龙葵碱作用后Panc-1细胞的形态学改变;CCK-8比色法检测龙葵碱对Panc-1细胞增殖的抑制作用;用流式细胞术Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率;并以相对定量RT-PCR测定P53、Bcl-2和Bax的mRNA表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞凋亡调节基因P53和Bcl-2、Bax蛋白的表达。
结果:龙葵碱显著抑制人胰腺癌细胞Panc-1生长,并具有浓度时间依赖性。倒置显微镜观察发现随着龙葵碱浓度增加和作用时间延长,Panc-1细胞变圆、皱缩、漂浮并破碎,死亡逐渐增加;CCK-8比色法发现随着龙葵碱浓度增加和作用时间延长,对Panc-1细胞的增殖抑制作用逐渐增强;流式细胞术检测发现Panc-1细胞的凋亡率随着龙葵碱浓度增加而逐渐增加;相对定量RT-PCR和Western blot结果显示龙葵碱能上调Panc-1细胞P53、Bax的mRNA和蛋白表达,表达量随着龙葵碱浓度增大逐渐增多,同时下调Bcl-2 mRNA的和蛋白表达;表达量随着龙葵碱浓度增大逐渐减少。
结论:(1)龙葵碱具有对胰腺癌细胞的增殖抑制作用,并具有时间浓度依赖性。(2)龙葵碱具有诱导胰腺癌细胞Panc-1凋亡的作用,并具有浓度依赖性。(3)龙葵碱诱导人胰腺癌细胞凋亡的机制可能与上调P53、Bax基因和下调Bcl-2基因有关。