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目的神经干细胞(NSCs)具有自我更新、向各谱系神经细胞分化的能力等特征,已有文献指出,干细胞微环境对干细胞增殖、分化等行为有重要作用。本研究中我们探讨的是蛋白激酶PRKD1对胞外基质Fibronectin诱导的NSCs分化的影响,其潜在机制可能与PAX6相互作用有关。方法1.用Fibronectin包被以及生长因子EGF与FGF撤除诱导体外培养的大鼠皮层神经干细胞贴壁,用免疫荧光方法鉴定。2.用形态学观察、细胞免疫荧光、Ed U渗入等方法观察干细胞的增殖分化情况。3.用Western blot、核质分离实验及细胞免疫荧光方法检测神经干细胞分化过程中黏着斑激酶FAK、蛋白激酶PRKD1、转录因子PAX6的定位及表达水平的变化。4.FAK活性的抑制用FAK inhibitor14,PRKD1活性的抑制用CRT 0066101以及si RNA干扰。5.用免疫共沉淀(Co-IP)、GST-Pull down分析NSCs分化过程中PRKD1与PAX6、FAK间相互作用情况。结果1.成功鉴定体外培养的大鼠NSCs。2.生长因子撤除和Fibronectin包被诱导神经干细胞向神经元分化方法,神经元的分化比例较高。3.Fibronectin诱导NSCs分化过程中,FAK表达水平升高,且活化水平显著上升,FAK抑制剂FAK inhibitor14处理降低p-FAK水平并抑制NSCs分化。4.Fibronectin诱导NSCs分化过程中,PRKD1表达水平、活化水平显著升高,且核质分离实验显示胞核胞质中均表达。5.Fibronectin诱导NSCs分化过程中Co-IP实验证明PRKD1与PAX6、FAK具有相互作用,GST-Pull down实验证明PRKD1与PAX6有直接相互作用。6.PRKD1抑制剂处理和si RNA敲降PRKD1后,NSCs分化程度降低,增殖能力提高,PAX6的蛋白水平显著升高。结论Fibronectin诱导NSCs分化过程中,PRKD1的表达量上升,抑制PRKD1的活性和干扰PRKD1表达影响NSCs的分化与增殖。PRKD1对FN诱导分化有促进作用;PRKD1与转录因子PAX6及黏着斑激酶FAK均有相互作用,且与PAX6具有直接相互作用;PRKD1可能是FAK的下游分子,并是PAX6的上游分子,在FN诱导分化模型中存在FAK→PRKD1→PAX6的一个信号通路调控NSCs的分化,推测PRKD1可能使PAX6磷酸化修饰影响其降解。