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背景与目的:基因易感位点的评估是目前1型糖尿病(Type 1 diabetes,T1D)预测和筛选系统中一个重要组成部分。IFIH1基因多态性(rs3747517和rs1990760)近来被证实与T1D具有明显的相关性,并在不同人群中的重要性不同。考虑IFIH1蛋白介导的对于病毒RNA的干扰素反应可能是引起T1D自身免疫反应的机制之一,本研究不仅探讨了该基因多态性在汉族人群中与T1D的相关性,还进一步探索其与T1D自身抗体——谷氨酸脱羧酶抗体(Glutamic acid decarboxylase antibody, GADA)、蛋白酪氨酸磷酸酶抗体(protein tyrosine phosphatase IA2 antibody, IA-2A)、胰岛素抗体(Insulin autoantibody, IAA)和ZnT8自身抗体(Zine transporter 8 antibodies, ZnT8A)之间的关系。此外,基于目前发现的HLA基因的T1D易感位点和研究对象的临床特征,本文也将探索HLA易感基因、研究对象的临床特征与IFIH1基因多态性之间的相关性。以上相关性的分析结果,有助于进一步认识IFIH1基因多态性在汉族人群T1D发病中的作用,从而完善T1D的预测和筛选系统。实验方法:1.标本来源:临床确诊的T1D患者464例,平均年龄(29.7±13.7)岁,其中男240例,女224例。患者均为江苏省公立医院门诊和住院患者,符合1999年WHO糖尿病诊断标准。健康对照组465名,平均年龄(31.1±7.4)岁,其中男221名,女244名,均无糖尿病家族史和自身免疫性疾病史,空腹和餐后2h血糖均正常,所有入选者排除心、肝、肾等器质性疾病及内分泌急性并发症,所有试验对象均取得知情同意。T1D自身抗体阳性和阴性质控血清标本均取自于美国Barbara Davis Center for ChildhoodDiabetes实验室。2. IFIH1基因rs3747517位点的多态性分析:抽提患者及健康对照组DNA后采取聚合酶链-限制性片段长度多态性分析(Polymerase Chain reaction and restriction fragment polymorphism,PCR-RFLP)技术,PCR产物用限制性内切酶HinⅢ酶切,在2%的琼脂糖电泳后于紫外灯下观察酶切结果。3. IFIH1基因rs1990760位点的多态性分析:抽提患者及健康对照组DNA后采取Taqman聚合酶链反应技术(TaqMan PCR),然后用SDS软件行SNP数据分析。4.胰岛自身抗体ZnT8A及GADA、IA-2A、IAA的检测:从T1D患者中随机选取82例,清晨抽取空腹静脉血,离心后收集血清,于-20℃保存备用。运用放射免疫沉淀法(radio-immunoprecipitation assay)检测胰岛ZnT8A、GADA、IA-2A及IAA四种自身抗体,结果用抗体指数来表示。5. HLA-DR、DQ基因分型的检测:从T1D患者中随机选取79例,抽提患者DNA后采用PCR-SSO技术(polymerase chain reaction restriction sequence specific oligonacleotide,PCR-SSO)进行HLA-DR、DQ基因分型。实验结果:1.在IFIH1 rs3747517位点,T1D组A等位基因频率明显低于健康对照组(52.8% vs 66.45%),G等位基因频率则相反(47.2% vs. 33.55%)。按基因型比较,T1D组和对照组仍有显著差异(AA :24.57% vs. 45.16%, P<0.001; AG :56.47% vs. 42.58%, P=0.01;GG:18.97% vs. 12.26%, P=0.02)。在IFIH1 rs1990760位点,T1D组和对照组在等位基因水平和基因型水平的频率分布都无统计学差异(P>0.05)。2.从T1D组中选取的82例患者符合随机原则(经卡方检验,在IFIH1 rs3747517的等位基因水平,P=0.53;在基因型水平,P=0.15)。分析患者四种抗体结果发现,在GADA(+)、ICA(+)、IAA(+)、ZnT8A(+)四组间,IFIH1 rs3747517位点等位基因频率和基因型分布无明显差异(P=0.86和P=0.95);在至少1个抗体阳性亚组和至少2个抗体阳性亚组间,IFIH1 rs3747517位点的等位基因频率和基因型分布也无明显差异(P=0.29和P=0.55)。3.从T1D组中选取的79例患者符合随机原则(经卡方检验,在IFIH1 rs3747517和rs1990760位点的等位基因水平,P=0.5和P=0.72;在基因型水平,P=0.69和P=0.77)。根据患者HLA-DRB1和HLA-DQB1基因型检测结果,在有易感基因的高危组(DRB1*04, 0301, 0901 or DQB1*0201, 0302)和无易感基因的低危组间,等位基因和基因型的频率分布无统计学差异(rs3747517位点:P=0.68和P=0.8;rs1990760位点:P=0.1和P=0.26)。4.从T1D组中多次随机抽取患者(经卡方检验,在IFIH1 rs3747517和rs1990760位点的等位基因和基因型水平,P>0.5),将患者基本信息(发病年龄、性别和家族史),临床体征(BMI),生化检查结果(空腹C肽和餐后2hC肽)与IFIH1 SNP结合分析示:在IFIH1 rs3747517、rs1990760位点不同基因型亚组,患者的发病年龄、性别、家族史、BMI、空腹C肽和餐后2hC肽均无统计学差异(P>0.05)。结论:在汉族人群中,IFIH1 rs3747517位点基因多态性与T1D的发病有明显的相关性,而rs1990760则没有。IFIH1 rs3747517位点G等位基因可能与T1D易感性有关,但rs3747517位点基因多态性对GADA、ICA、IAA和ZnT8A的阳性率无明显影响。此外,IFIH1 rs3747517、rs1990760位点基因多态性与HLA-DRB1、HLA-DQB1易感基因型的相关无统计学差异,与患者的临床表型(发病年龄、性别、家族史、BMI、空腹C肽和餐后2hC肽)也无明显相关。