玄麦甘桔颗粒源于古方玄麦甘桔汤,是2015版《中国药典》的载入品种,由玄参、麦冬、甘草、桔梗4味药材组成,具有滋阴养肺、促进痰液排除、保护咽喉避免病毒和细菌损伤的功效,用于治疗阴气亏损不能抑阳,虚火上延所致的咽炎、咳嗽等呼吸道系统疾病。该药临床使用较为广泛,效果明确。目前,国内学者对该药的研究主要集中在含量测定和质量控制,而该药活性成分药代动力学方面的研究尚无报道。本实验建立了灌胃给药后大鼠血浆中甘草苷及哈巴俄苷的UPLC-MS/MS法。该方法灵敏度高、可操作性强,获得了玄麦甘桔颗粒中主要有效成分的药代动力学参数。填补了该药体内研究的空白,为该药临床应用提供依据。第一部分玄麦甘桔颗粒中2种化学成分含量测定目的:建立同时测定玄麦甘桔颗粒中2种入血活性成分(甘草苷、哈巴俄苷)的含量分析方法。方法:精密称取玄麦甘桔颗粒剂0.1 g,加入50%乙醇30 m L,称定质量,超声处理0.5 h,冷至室温,用50%乙醇补足减失的质量,摇匀,14 000 rpm离心5 min,取上清液过0.22μm微孔滤膜,取续滤液作为供试品溶液。采用超高效液色谱相串联质谱(UPLC-MS/MS)法,Phenomenex Kenetix C18柱(50 mm×3 mm,2.6μm),流动相为乙腈和含0.1%甲酸的水溶液梯度洗脱,体积流量0.3 m L/min;以电喷雾离子源(ESI)模式的多离子反应监测(MRM)扫描方式进行分析测定,进样量5μL。结果:甘草苷、哈巴俄苷分别在2.1~420.0 ng/m L、1.6~320.0 ng/m L内线性关系良好,r≥0.9945。甘草苷和哈巴俄苷平均回收率均大于95%,RSD小于4.6%,表明方法回收率良好。结论:该方法可操作性强、快速、灵敏度高、专属性好可用于玄麦甘桔颗粒中入血成分甘草苷及哈巴俄苷成分含量分析。第二部分玄麦甘桔颗粒中2种成分的药代动力学研究目的:建立UPLC-MS/MS方法测定玄麦甘桔颗粒活性成分在大鼠体内药代动力学研究。方法:收集灌胃给予大鼠玄麦甘桔颗粒后的血浆样品,定量吸取样品血浆用乙腈沉淀蛋白后进行样品分析,以芦丁作为内标,乙腈-0.1%甲酸水溶液作为流动相梯度洗脱,流速0.3 m L/min,色谱柱为Phenomenex Kenetix C18柱(50 mm×3 mm,2.6μm),柱温20℃。采用ESI源,MRM及负离子模式进行监测。进样量:10μL。并用DAS 3.0软件计算药动学参数。结果:该方法甘草苷、哈巴俄苷分别在0.78-50.00 ng·m L-1(r=0.9979)、1.66-106.10 ng·m L-1(r=0.9958)线性关系良好。精密度、准确度、检测限和定量限均符合要求。2种被分析物血浆样品RE值均小于±15%稳定性良好。甘草苷低中高三种浓度的回收率范围分别为(61.4%、67.7%、74.3%),低中高三种浓度基质效应分别为(93.2%、93.57%、95.6%);哈巴俄苷低中高三种浓度的回收率范围分别为(71.5%、70.6%、82.3%),低中高三种浓度基质效应分别为(89.5%、87.6%、90.2%),均在允许范围内。大鼠灌胃玄麦甘桔颗粒后,甘草苷Cmax为27.55±21.12 ng/m L、Tmax为0.31±0.19 h、T1/2为3.46±2.08 h、AUC0→t为48.82±11.35 ng·h/m L、AUC0-∞为54.17±16.31 ng·h/m L;哈巴俄苷Cmax为16.28±14.53 ng/m L、Tmax为0.33±0.18 h、T1/2为3.28±1.17 h、AUC0→t为64.85±46.70 ng·h/m L、AUC0-∞为69.82±48.27 ng·h/m L。结论:该方法灵敏度高,专属性强,简便、快速,可用于大鼠灌胃玄麦甘桔颗粒后血浆中2种活性成分的药代动力学研究。药动学研究结果可为指导临床用药提供参考依据。