肠道沙门氏菌强致病血清型分子鉴定方法研究

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沙门氏菌是一种常见的食源性致病菌。根据国际公认的分类及命名原则,沙门氏菌属由两个种组成,即肠道沙门氏菌种与邦戈尔沙门氏菌种。肠道沙门氏菌是沙门氏菌属中血清型最为丰富的一类,其大多数血清型具有病原性。其致病性较强的菌株有肠炎沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、伤寒沙门氏菌、鸡沙门氏菌等。当前,肠道沙门氏菌的检测鉴定主要基于传统方法,通常耗时5-7天左右,不利于及时诊断病情与控制疫情蔓延。因此,有必要建立一种快速、准确、高效的方法用于肠道沙门氏菌的检测。本研究基于肠道沙门氏菌共有基因序列和肠炎沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、伤寒沙门氏菌、鸡沙门氏菌几种强致病性血清型的特异性序列,分别设计引物及探针,运用实时荧光PCR技术在种的水平上检测到肠道沙门氏菌,同时又能在血清型水平上鉴定肠炎沙门氏菌等几种强致病血清型。采用肠道沙门氏菌引物及探针可以检测到25种不同血清型的沙门氏菌(共49株),而11株阴性对照菌株未得到有效扩增;利用肠炎沙门氏菌引物及探针能特异性鉴定出全部15株肠炎沙门氏菌,而其它34株非肠炎血清型的沙门氏菌及11株阴性对照菌株均未得到扩增;利用鼠伤寒沙门氏菌引物和探针能特异性鉴定11株鼠伤寒沙门氏菌,而38株非鼠伤寒血清型的沙门氏菌与11株阴性对照菌株均未得到有效扩增;利用伤寒沙门氏菌的引物和探针能特异性鉴定31株伤寒沙门氏菌,而其它110株非伤寒血清型的沙门氏菌与22株阴性对照菌株均未得到有效扩增;利用鸡沙门氏菌引物和探针能特异性鉴定34株鸡沙门氏菌,而其它107株非鸡血清型的沙门氏菌与22株阴性对照菌株均未得到有效扩增。此外,本研究通过模拟样品实验证明了实时荧光PCR检测结果与生化培养鉴定检测结果的一致性。本研究建立了基于TaqMan探针荧光PCR快速鉴定肠道沙门氏菌、肠炎沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、伤寒沙门氏菌、鸡沙门氏菌的方法。该法特异性强、操作简便,易于标准化,在食源性疾控预防及食品安全检验等领域具有广泛的应用前景。
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