好氧反硝化芽孢杆菌筛选及其水产养殖水质调控研究

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好氧反硝化细菌是自然界中一类能够在有氧条件下进行反硝化去除有害氮素污染的细菌总称,与传统意义上的厌氧反硝化细菌相比,该类菌能够克服O2对其反硝化特性的抑制,可同时进行有氧呼吸和反硝化还原酶呼吸,代谢NO-3-N、NO-2-N产生N2,该类细菌可以有效地缓解养殖水体中有害氮素的污染以及对水产养殖动物的危害,目前已成为水产养殖水体除氮微生物研究的热点。芽抱杆菌是一类好氧或兼性厌氧的革兰氏阳性细菌,是一种被公认为有发展前景的优良益生菌,芽孢杆菌可产生多种酶类,有效提高动物机体消化酶活性,促进动物生长,提高机体免疫力,具有一定的预防疾病的能力,同时该类菌株还有较好的净化水质的能力,可有效分解有机废物,去除有毒物质,作为微生态制剂优良菌剂之一,已在水产养殖中广泛应用。本论文针对养殖水体亚硝酸盐氮的有效去除,从水产用益生芽孢杆菌中对好氧反硝化细菌进行分离、筛选,研究其好氧反硝化特性,并对其在水产养殖水质调控的应用进行了相关评价。现分别报道如下:   试验对采集水样与泥样进行菌种分离,初步筛选出18株细菌,通过形态及染色观察后发现这18株细菌均为革兰氏阳性菌,产芽孢。将这些细菌通过BTB培养基初筛,从中筛选出8株能够使BTB平板变色的细菌,对这8株细菌好氧反硝化性能进行比较研究,最终筛选出一株能够高效降解亚硝酸盐氮的菌株,暂命名为YX-6,并对该菌生长及反硝化性能的关系进行研究发现,该菌可将亚硝酸盐氮由10mg/L降至0,对亚硝酸盐氮的去除率可达100%;该菌可在ρ(DO)为5.2~5.8mg/L时,对亚硝酸盐氮的去除率接近100%;同时研究了不同温度、pH、盐度及碳源对该菌生长及反硝化性能的影响。发现该菌反硝化作用主要发生在对数生长期;该菌最适生长及反硝化温度为30℃;pH范围为7~9时最适于该菌生长及反硝化性能的发挥;该菌最适盐度范围为0~15;丁二酸钠、乙酸钠为该菌生长及反硝化的最适碳源。   试验采用生理生化鉴定以及16S rDNA分子鉴定对所分离筛选出来的芽孢杆菌YX-6菌株进行鉴定,初步鉴定其为凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans),登录号GU288875。同时对该菌株亚硝酸还原酶基因序列分析,结果表明该菌含有亚硝酸还原酶nirS基因。   试验对所筛选的好氧反硝化细菌YX-6反硝化特性进行研究,同时试验选取具有降氮功能的芽孢杆菌作为阳性对照菌,比较研究了YX-6菌株在不同pH,温度,ρ(亚硝酸盐氮)和盐度时好氧反硝化的性能.通过比较试验研究发现,芽孢杆菌YX-6的好氧反硝化性能显著高于阳性对照菌(P<0.05),能够在pH为5~9的范围内对亚硝酸盐氮始终保持接近100%的去除率.pH为3时,菌株YX-6去除率可达到80%;pH为11时也仍有一定的反硝化活性;相比2株对照菌而言,芽孢杆菌YX-6能够在25~40℃温度范围内始终保持较高的反硝化活性,在40℃高水温条件下,对亚硝酸盐氮的去除率仍可达90%以上。在ρ(亚硝酸盐氮)为20~100mg/L时,该菌均可保持较高的反硝化活性,同时该菌有较强的耐盐特性,可在盐度为30时,仍可有一定的反硝化性能。   向对虾池塘中泼洒芽孢杆菌YX-6后,在整个7天的试验时间周期内,该菌能够很好的调节改善养殖水体环境,与对照组相比,该菌能使水体pH值稳定在8.0~8.3之间,可显著的提高养殖水体DO值,同时可有效的去除水体中过量的氨氮,使其浓度由1..7mg/L降至0..35mg/L,降解率达79.4%。对亚硝酸盐氮也有显著的降解作用,使其浓度由0.64mg/L降低至0..05mg/L,降解率达92%,且在用药后期无反弹现象。
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