抗疏健骨颗粒对去卵巢大鼠模型骨组织自噬水平的影响

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目的:本研究通过动物验实观察抗疏健骨颗粒对OVX大鼠的自噬水平的影响,为抗疏健骨颗粒在预防、诊断、治疗骨质疏松症方面提供实验依据,并进一步研究骨质疏松发病机理。本实验用Western blotting法检测OVX模型大鼠骨组织中自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、Beclin1及P62的表达。观察中药抗疏健骨颗粒对OVX模型大鼠的骨组织中自噬水平的影响。为中药抗疏健骨颗粒在临床上应用提供理论实验依据。  方法:将3月龄的60只SD雌性大鼠,根据随机数表法分为假手术组12只,造模组48只。实验大鼠均采用“摘除双侧卵巢”方式造OVX骨质疏松症模型,造模组切除双侧卵巢,假手术组不切除双侧卵巢只切除卵巢附近重量相近大网膜。喂养12周确定造模成功后,将造模组先按照体重分层再随机分成4组,模型组、抗疏健骨颗粒小剂量组、抗疏健骨颗粒中剂量组、抗疏健骨颗粒大剂量组。各组灌胃给药,模型组及假手术组灌生理盐水,其余组给予抗疏健骨颗粒中药灌胃,每日一次,正常喂养12周后于末次灌胃给药后处死,取血并取双侧股骨保存,行Elisa法检测各组大鼠血清中的抗酒石酸酸性磷酸酶及碱性磷酸酶含量,行Western blotting法检测各组模型大鼠股骨中自噬相关蛋白P62,LC3-Ⅱ及Beclin1的表达。  结果:①与假手术组相比较(P<0.05),模型组的血清中的ALP含量增高;与模型组相比较,大、中、小剂量组ALP含量均降低(P<0.05);而大、中、小剂量组之间两两相比(P<0.05),中剂量组血清中ALP含量最低;②与假手术组相比较(P<0.05),模型组血清中的TRACP含量增高;与模型组相比较,大、中、小剂量组血清中TRACP含量均降低(P<0.05);大、中、小剂量组之间两两相比(P<0.05),中剂量组血清中TRACP含量最低。③模型组与假手术组对比,骨组织内的LC3-Ⅱ及Beclin1蛋白表达的灰度值升高(P<0.05),p62蛋白表达的灰度值降低(P<0.05);模型组与大、中、小剂量组之间相比,LC3-Ⅱ及Beclin1蛋白表达的灰度值升高(P<0.05),p62蛋白表达的灰度值降低(P<0.05);大、中剂量和小剂量组对比,LC3-Ⅱ及Beclin1蛋白表达的灰度值降低(P<0.05),P62蛋白表达的灰度值明显升高(P<0.05);大,中剂量比较蛋白灰度值变化不明显,经SPSS检验无统计学差异。  结论:①绝经后骨质疏松大鼠骨组织自噬水平增高,自噬水平的升高是引起骨质疏松的原因之一;②抗疏健骨颗粒大、中、小剂量组骨组织自噬水平较OVX模型组降低,其OP治疗作用与抑制自噬水平有关。③抗疏健骨颗粒能够降低OVX大鼠血清中的ALP含量,以中剂量最为显著;②抗疏健骨颗粒能够降低OVX大鼠血清中的TRACP5b含量,以中剂量最为明显。
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