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脑胶质瘤是人类最常见的难治性原发性颅内肿瘤,其中多形性胶质母细胞瘤占总原发性脑胶质瘤的50%以上。尽管目前外科手术切除、放疗、化疗和生物疗法等综合治疗措施有很大的进步,但预后仍较差,平均中位生存率不足一年。胶质母细胞瘤呈现快速、弥漫性侵袭生长和高度异质性,与治疗抵抗密切相关。目前研究证实,胶质瘤是一种多基因异常疾病,涉及多种原癌基因、抑癌基因及多个信号转导通路,是恶性胶质瘤发生进展的重要分子学机制。因此,寻找导致恶性胶质瘤发病相关的基因,研究其在胶质瘤中的分子病理,对探索胶质瘤治疗的新方法有重要作用,是目前该领域研究的热点之一。Hippo通路是最早在果蝇中发现的进化上高度保守的级联激酶通路,其在胚胎发育和器官形成以及肿瘤发生发展过程中起着重要作用,在发育过程中通过抑制细胞增殖和促进凋亡,起到限制器官大小的作用。TAZ是Hippo通路中关键的效应因子之一,有研究表明,TAZ在人乳腺癌、肝癌、结肠癌等多种肿瘤中高表达并且与肿瘤的转移及预后相关,而目前TAZ在胶质瘤中的研究甚少。我们检测了8个胶质瘤细胞系（A172、LN308、U118、U87、U251、LN229、SNB19、TJ899）、3例正常脑组织和41例不同级别脑胶质瘤,发现TAZ在大多数胶质瘤细胞系以及胶质瘤标本中与正常组织比较均过表达,结果初步提示TAZ可能与胶质瘤发生发展有关联。为了进一步探讨TAZ与胶质瘤的关系,本研究将对TAZ对胶质瘤细胞生物学行为的影响及可能机制做更深入研究。本课题研究共分三部分:第一部分:对临床取留标本中的41例不同级别胶质瘤组织标本、3例正常脑组织标本和8个胶质瘤细胞系提取RNA、总蛋白及核浆蛋白,采用Real-time PCR、Western blotting方法检测TAZ m RNA及蛋白的表达定位情况。运用免疫组织化学染色和组织免疫荧光技术检测组织标本切片中TAZ的定位及表达情况。研究胶质瘤中TAZ表达水平与胶质瘤级别之间的相关性。第二部分:本研究中采用TAZsi RNA敲低胶质瘤细胞系中TAZ表达较高的两个细胞LN229和SNB19,以及对表达TAZ低的胶质瘤细胞U118和U87转染TAZ质粒上调TAZ的表达,观察TAZ对胶质瘤细胞生物学行为的影响。应用Real-time PCR和Western blotting方法检测转染TAZsi RNA和TAZ质粒后胶质瘤细胞中TAZ表达情况,转染成功后分别进行细胞生物学行为的检测:MTT比色法测定TAZ对胶质瘤细胞增殖的影响;划痕和Transwell试验检测胶质瘤细胞迁移侵袭能力的变化;流式细胞术和Annexin V标记法分别检测胶质瘤细胞周期及凋亡的变化。免疫共沉淀检测TAZ与TEAD4是否共结合,western blotting检测c-myc表达的变化。第三部分:建立LN229细胞来源的颅内原位胶质瘤模型,生物发光成像检测肿瘤生长情况,观察记录裸鼠的生存期;免疫组化检测TAZ以及增殖、侵袭、凋亡相关指标变化变化;TUNEL实验检测凋亡情况。结果:第一部分:41例胶质瘤组织中38例TAZ表达高于正常脑组织,且随着肿瘤级别增高而增高,Ⅲ/Ⅳ级肿瘤标本中TAZ表达明显高于Ⅰ/Ⅱ级肿瘤标本,同时还检测到与正常细胞比较,8个恶性胶质瘤细胞系中7个表达增高,其中以LN229、SNB19细胞高表达最为显著,U118细胞表达低于正常对照,Western blotting检测结果与Real-time PCR结果相一致。组织免疫荧光及核浆蛋白检测显示TAZ在胞浆胞核中均有表达,且随肿瘤级别增高胞核TAZ表达增高,p-TAZ仅存在胞浆中。第二部分:转染TAZsi RNA可明显敲低胶质瘤细胞系LN229和SNB19细胞中TAZ的表达,进而抑制胶质瘤细胞增殖活性,使细胞存活率下降,阻滞细胞周期于G0/G1期,侵袭迁移能力明显受抑制,凋亡细胞增加;将胶质瘤细胞系U87和U118细胞转染TAZ质粒后TAZ表达升高,其增殖活性,使细胞存活率均升高;G0/G1期细胞减少,S期细胞增加,迁移侵袭能力明显增强,凋亡细胞减少。免疫共沉淀结果显示TAZ可与TEAD4结合,c-myc随TAZ的变化而变化。第三部分:体内实验表明转染Lenti‐TAZsi敲低TAZ的表达后,3次成像裸鼠颅内肿瘤信号强度与对照组相比均降低,Kaplan‐Meier生存分析结果显示Lenti‐TAZ si组生存率明显高于Lenti‐NC组,差异有统计学意义。免疫组化和TUNEL结果表明显示敲低TAZ表达后,肿瘤增殖、侵袭指标表达降低,而凋亡增多。结论:1.TAZ基因在胶质瘤细胞系和胶质瘤标本中高表达,并与肿瘤级别呈现正相关,提示TAZ与胶质瘤密切相关。2.TAZ可抑制胶质瘤细胞的增殖和侵袭能力,诱导凋亡,过表达TAZ可促进胶质瘤细胞的增殖和侵袭能力,减少凋亡,TAZ可能通过与TEAD4结合作用于c-myc发挥作用。3.体内实验证实降低TAZ的表达可以抑制LN229胶质瘤颅内模型肿瘤的生长,延长裸鼠生存期。4.通过对TAZ对胶质瘤生长调控作用的研究,证实了TAZ在胶质瘤中的癌基因作用,体内外实验结果一致,为人脑胶质瘤基因治疗提供新的候选靶点。