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目的:运用血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor,VEGF）抗体阻断白血病K562细胞株VEGF的自分泌作用,探讨其对K562细胞增殖、凋亡及相关基因表达的影响;将携带抗VEGF发夹状核酶基因的真核表达载体转导白血病细胞株K562,建立稳定表达的细胞株克隆,探讨抗VEGF发夹状核酶基因对K562细胞增殖、凋亡等生物学行为的影响及其分子机制;构建血管内皮细胞生长因子受体（VEGFR）Flt-1和KDR特异性短发夹环RNA（shRNA）真核表达载体,并将Flt-1ShRNA导入白血病细胞株K562,观察对白血病细胞Flt-1基因表达的作用,并探讨其对白血病细胞浸润能力的影响及其机制。 方法:将不同浓度的VEGF抗体作用于白血病细胞株K562,采用台盼兰拒染细胞直接计数和MTT方法测定抗体处理前后白血病细胞株K562增殖速度和细胞生长抑制率:DNA凝胶电泳法检测抗体处理前后白血病细胞的凋亡程度;应用RT-PCR法测定抗体处理前后白血病细胞株K562中相关基因表达的变化。采用脂质体介导的方法将抗VEGF发夹状核酶基因真核表达载体pcDNA-RZ转染白血病细胞株K562,G418抗性筛选获得阳性克隆;抽提基因组DNA,用PCR方法验证核酶基因已转入K562细胞;荧光定量PCR和免疫印迹反应检测白血病细胞中VEGF mRNA和蛋白表达量的改变;采用台盼兰拒染细胞直接计数、MTT法、甲基纤维素半固体培养法和细胞周期测定分析抗VEGF发夹状核酶基因对白血病细胞增殖的影响;DNA凝胶电泳和AnnexinⅤ检测白血病细胞的凋亡程度;将白血病细胞皮下接种BALB/c裸鼠,检测转染核酶基因前后白血病细胞致瘤能力的变化。采用Tuschl法设计并合成被9bp序列间隔的19bp长短的针对VEGF受体Flt-1和KDR靶序列的反向重复序列,将其连入带有人U6启动子的pEGFP-C1质粒载体中,构建Flt-1和KDR特异性的短发夹环RNA（Short hairpin RNA,ShRNA）重组质粒Cl/U6/FltS及Cl/U6/KDRS;分别用PstⅠ和Sall酶切鉴定;并将经酶切鉴定正确的重组质粒作测序分析;将构建的人Flt-1基因特异性shRNA真核表达载体转染K562细胞,观察白血病细胞Fit-1基因表达的高低及对白血病细胞浸润能力的影响。 结果:1、抗VEGF抗体能抑制白血病细胞株K562的生长,促进白血病细胞的凋亡,这一作用呈剂量依赖关系,当抗体浓度为0.033μg/ml时,白血病细胞生长抑制率仅为13.2±6.3%,而当抗体浓度增加到0.825μg/ml时,抑制率达到