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研究目的:通过建立慢性萎缩性胃炎(chronic atrophic gastritis,CAG)大鼠模型,从形态学(HE染色,CD34染色切片)、抗氧化损伤(SOD、MDA)、细胞增殖与凋亡(P53,PCNA)、信号通路(Wnt通路)多方面进行研究,观察荣胃理气方联合守宫对CAG模型大鼠胃粘膜的修复作用和机制。研究方法:选用72只健康纯种SPF级SD雄性大鼠,将其饲养在SPF环境中。适应性喂养1周后,给予去氧胆酸钠溶液自由饮用联合酒精灌服及饥饱失常喂养法刺激大鼠诱发CAG模型。将造模成功的大鼠进行随机分组,分别为空白对照组(K)、模型组(M)、中药治疗组(Z)、胃复春组(W)、叶酸组(Y),每组10只。造模成功后于第三天开始灌胃给药,药物干预28天后进行采血以及取材。应用HE染色法观察各组大鼠胃粘膜的病理变化,应用CD34免疫组化染色法检测大鼠胃粘膜的微血管数量及微血管密度;使用ELISA法检测大鼠血清中胃泌素(GAS)、超氧化物歧化酶(S OD)/丙二醛(MDA),血清生长抑素(SS)/血清前列腺素E2(PGE2)的含量;应用免疫组织化学法检测各组大鼠胃粘膜中P53以及PCNA的基因表达水平;同时应用免疫组化法检测大鼠胃粘膜中β-catenin、GSK-3β、cyclin D1以及COX-2蛋白的表达水平。结果:1.对CAG模型大鼠组织形态的影响通过HE染色,结果显示,模型组大鼠的胃粘膜出现了充血、水肿以及腺管排列紊乱等表现,并且黏液层脱落增多,胃小凹可见变浅,而粘膜固有层变薄并且出现了萎缩,腺体腔变小以及数目减少,伴有囊性扩张,粘膜下层水肿明显,炎性细胞散在分布,固有层内出现淋巴细胞浸润等病变。中药治疗组中的各大鼠胃粘膜罕见糜烂和缺损,并未出现胃溃疡病灶,且粘膜层的厚度大致都是正常的,腺体排列也是基本整齐的,数量并未见明显减少,亦无肠上皮化生以及不典型增生等病变。胃复春组的大鼠胃粘膜有少许的糜烂和缺损,偶可见有溃疡病灶,粘膜层稍有增厚,腺体排列略显紊乱,数量减少大致约二分之一左右,偶可见肠上皮化生以及不典型增生等改变。叶酸片组中的大鼠胃點膜少见糜烂、缺损,偶有溃疡的病灶,粘膜变厚,腺体排列略显紊乱,数量减少大致有1/2左右,偶有肠上皮化生等形态变化。通过CD34染色,然后检测大鼠胃粘膜微血管数量(MVC)以及微血管密度(MVD),结果显示,与空白对照组比较,模型组大鼠MVD值明显降低(P<0.01);与模型组比较,中药治疗组数值明显升高(P<0.01);免疫组化染色显示空白组胃黏膜有不同程度的充血反应,模型组可见胃黏膜上皮及固有腺体细胞增生,黏膜固有层和黏膜下层间质有血管数量减少。经中药方治疗后胃黏膜微血管密度增多,接近正常,中药治疗组与胃复春组及叶酸组比较亦有统计学意义(P<0.05)。2.对慢性萎缩性胃炎大鼠血清GAS、SS、PGE2、SOD、MDA的影响与空白对照组比较,模型组大鼠胃泌素(GAS)水平明显降低(P<0.01);与模型组比较,中药治疗组血清胃泌素(GAS)水平均明显升高(P<0.01);与胃复春组比较,中药治疗组血清胃泌素(GAS)水平升高具有统计学意义(P<0.05);中药治疗组与叶酸组比较,血清胃泌素(GAS)水平无统计学差异(P>0.05)。与空白对照组比较,模型组大鼠血清生长抑素(SS)和前列腺素(PGE2)水平显著降低(P<0.01);与模型组比较,中药治疗组大鼠血清生长抑素(SS)和前列腺素(PGE2)水平显著升高P<0.01),与叶酸组、胃复春组比较,血清生长抑素(SS)和前列腺素(PGE2)变化上无统计学差异(P>0.05)。与空白对照组比较,模型组大鼠血清超氧化物歧化酶(SOD)活力降低,丙二醛(MDA)数值升高(P<0.05);与模型组比较,中药治疗组SOD活力明显升高,MDA水平明显降低(P<0.01),与胃复春组、叶酸组比较,中药治疗组在SOD、MDA变化上无统计学差异。3.对慢性萎缩性胃炎大鼠胃黏膜P53、PCNA基因表达的影响与空白对照组相比,模型组大鼠胃黏膜组织P53水平明显高于正常组(P<0.01),胃黏膜组织病变明显。不同治疗组的P53指数明显降低,胃黏膜病理组织学改变明显。中药治疗组与模型组比较差异显著(P<0.01);中药治疗组与胃复春组比较差异显著(P<0.01),中药治疗组与叶酸组比较无明显差异(P>0.05)。与空白对照组相比,模型组大鼠胃黏膜组织PCNA水平明显高于正常组(P<0.01),胃黏膜组织病变明显。不同治疗组的PCNA指数明显降低,胃黏膜病理组织学改变明显。中药治疗组与模型组比较差异显著(P<0.01);中药治疗组与胃复春组、叶酸组比较差异显著(P<0.01)。4.对慢性萎缩性胃炎大鼠胃黏膜Wnt信号通路的影响与空白组相比,模型组GSK-3β的表达显著降低,差异有统计学意义(P<0.01)。中药治疗组、叶酸组、胃复春组GSK-3β的表达均升高,中药治疗组GSK-3β蛋白的表达情况要明显优于胃复春组和叶酸组(P<0.01)。与空白组相比,模型组β-catenin的表达显著升高,差异有显著统计学意义(P<0.01)。中药治疗组、叶酸组、胃复春组GSK-3β的表达均降低,中药治疗组β-catenin蛋白的表达情况要明显优于胃复春组和叶酸组(P<0.05)。与空白对照组相比较,模型组cyclin D1的表达增强,差异有显著统计学意义(P<0.01)。中药治疗组、叶酸组、胃复春组GSK-3β的表达均降低,与模型对照组相比差异有显著统计学意义(P<0.05)。中药治疗组疗效明显优于胃复春组和叶酸组(P<0.01)。与空白对照组相比较,模型组COX-2的表达增强,差异有显著统计学意义(P<0.01)。中药治疗组、叶酸组、胃复春组GSK-3β的表达均明显降低,与模型对照组相比差异有显著统计学意义(P<0.01)。中药治疗组疗效明显优于胃复春组和叶酸组(P<0.01)。结论:荣胃理气方联合守宫可以明显改善胃黏膜萎缩状态,增加胃黏膜区新生血管数目,对胃黏膜具有促血管新生作用,其效果优于胃复春和叶酸。荣胃理气方联合守宫可增加胃泌素,生长抑素及前列腺素E2的水平,降低丙二醛含量,抑制炎症反应,修复受损的胃黏膜,并能增加SOD活力。其对胃黏膜的修复作用可能与增加胃泌素、生长抑素、前列腺素E2水平、提升SOD活力,降低MDA含量有关。荣胃理气方联合守宫抑制胃黏膜P53、PCNA基因的过度表达,从而防止慢性萎缩性胃炎向胃癌转化,说明荣胃理气方联合守宫具有一定的优势,且其对胃黏膜修复作用可能与抑制P53、PCNA基因的过度表达有关。荣胃理气方联合守宫能明显提高胃黏膜GSK-3β、cyclin D1以及COX-2的表达,降低胃黏膜β-catenin的表达,其对胃黏膜修复的作用机制可能在于提高胃黏膜中相关生长因子,激活Wnt通路进而逆转胃黏膜萎缩,达到修复胃黏膜的作用。荣胃理气方联合守宫具有较好的胃黏膜修复作用,效果优于胃复春和叶酸。其能有效地抑制胃黏膜的氧化应激反应,提高胃黏膜的修复能力,发挥中医药整体调节、多靶点的作用特点,为荣胃理气方联合守宫临床治疗慢性萎缩性胃炎提供了部分实验依据。