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前列腺索(Prostaglandins. PGs)是哺乳动物体内广泛存在的一种局部激素,影响到哺乳动物生殖生理的各个环节,包括:排卵、着床、分娩、黄体溶解等。牛输卵管中主要存在PGE2和PGF2a,其对输卵管内容物的输送、精子和卵子的结合以及早期胚胎发育均发挥着重要的生理作用。本研究以奶牛输卵管上皮细胞为研究对象,探讨了雌激素(Estrogen, E2),对奶牛输卵管上皮细胞合成分泌PGE2和PGF2。及其受体的调控作有,具体研究内容如下:1.奶牛输卵管上皮细胞的PGs受体分析采用荧光定量PCR法检测奶牛输卵管上皮细胞PGs受体的种类,采用荧光探针法和ELISA法分别检测PGs对奶牛输卵管上皮细胞内Ca2+浓度和cAMP浓度的影响,进而推断PGs受体的生理功能性的存在。结果显示,奶牛输卵管上皮细胞中存在EP1、EP2、EP4、DP、FP和TP受体,其中EP2、EP4、DP受体表达量较高,而EP1、FP、TP表达量较低。2.E2对PGE2和PGF2a合成分泌及其受体的调控作用采用荧光定量PCR法检测E2对奶牛输卵管上皮细胞PGs合成酶以及PGs受体表达的调控作用,采用In cell western blot法进一步证明定量PCR的结果,并采用ELISA法检测E2对PGE2和PGF2a分泌的影响。结果显示,E2引起COX-2的表达在2小时内快速升高(P<0.01),并引起PGE2和PGF2α分泌量增多(P<0.05),8小时后COX-2表达的显著下降(P<0.01)以及COX-1表达的增高(P<0.01)引起PGE2:PGF2α比值的升高;mPGES-1的表达在4小时内快速升高(P<0.01),随后降低;mPGES-2与cPGES的农达不受到E2的影响;PGFS的表达在8小时后显著升高(P<0.01);CBR1的表达在8小时时有所升高(P<0.05);EP2和EP4受体的表达分别在4小时和48小时明显升高(P<0.05);FP受体的表达在4小时明显降低(P<0.05),在48小时又明显升高(P<0.05)。3.PGs对自身合成分泌的调控作用采用荧光定量PCR法检测PGs受体激动剂butaprost(EP2受体激动剂)和fluprostenol(FP受体激动剂)对PGs合成酶及PGs受体基因表达的调控。结果显示,butaprost可引起COX-2的表达在2小时内快速升高(P<0.01),随后降低;COX-1的表达在24小时后显著升高(P<0.01);mPGES-1的表达在8小时内显著降低(P<0.01),mPGES-2和cPGES的表达不受butaprost的影响;PGFS的表达在4小时内显著升高(P<0.01);CBR1的表达不受butaprost的影响;EP2和EP4受体的表达分别在2小时和48小时明显升高(P<0.05);FP受体的表达在8小时和48小时明显升高(P<0.05)。fluprostenol可引起COX-2的表达在4小时内快速升高(P<0.01),随后降低;COX-1的表达不受fluprostenol的影响;mPGES-1的表达在8小时后显著降低(P<0.01),mPGES-2和cPGES的表达不受fluprostenol的影响;PGFS的表达在4小时内显著升高(P<0.01);CBRl的表达不受fluprostenol的影响;EP2受体的表达在16小时内显著降低(P<0.01);EP4受体的表达在8小时内显著降低(P<0.01);FP受体的表达在2小时内明显降低(P<0.05),8小时后明显升高(P<0.05)。本研究的主要结论如下:1.奶牛输卵管上皮细胞存在EP1、EP2、EP4、DP、FP和TP受体,并介导着PGs在输卵管上皮细胞的生殖生理作用。2.E2可快速引起奶牛输卵管上皮细胞PGE2和PGF2a短期分泌的增多,并可引起PGE2-PGF2a比值的增高。3.E2可引起EP2、EP4和FP受体表达量的增高。4.PGE2和PGF2α对其自身分泌起到了正调控。