COX-2敲除对肝星状细胞增殖的影响

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目的:研究COX-2敲除对肝星状细胞增殖的影响,为临床上逆转肝纤维化提供新的依据以及策略。方法:1.体外培养的大鼠HSC-T6细胞,经过细胞培养传代后,按照病毒最适用量MOI=10,将LV-COX-2-sgRNA慢病毒载体转染至HSC-T6细胞,获得HSC-T6-COX-2-/-细胞,LV-NC-sgRNA转染至HSC-T6细胞获得HSC-T6-NC细胞,并将细胞分为3组:KO组(HSC-T6-COX-2-/-细胞)、NC组(HSC-T6-NC细胞)、CON组(HSC-T6细胞)。2.病毒转染72小时后,于荧光显微镜下观察,再计算转染效率;病毒转染成功后,分别于72h及96h提取3组中的COX-2蛋白,应用Western Blot方法在基因和蛋白水平上进行敲除验证;克隆形成、CCK8方法检测细胞增殖。结果:1.LV-COX-2-sgRNA慢病毒载体转染HSC-T6细胞72 h后,于荧光显微镜下观察,CON组未见绿色荧光出现,KO、NC组细胞可见绿色荧光,转染效率在80%以上,证明病毒转染成功。2.Western Blot检测结果表明:慢病毒转染HSC-T6细胞72h及96h后,KO组COX-2蛋白表达量较CON组和NC组均显著下调,提示COX-2基因敲除成功,差异有统计学意义(p<0.01)。3.克隆形成、CCK8检测结果表明:KO组较NC组、CON组HSC-T6细胞的增殖出现明显抑制作用,提示COX-2基因敲除可抑制HSC-T6细胞的增殖,差异有统计学意义(p<0.01)。结论:敲除HSC-T6细胞的COX-2基因,能够抑制HSC-T6细胞的增殖。
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