本实验采用RNA干涉（RNAi）的方法开展抗禽流感病毒转基因鸡的研究,首先将禽流感病毒H9N2毒株核蛋白基因（NP）插入真核表达载体pL-EGFP中EGFP的上游,获得了NP-EGFP融合基因表达载体pL-NP-EGFP作为禽流感病毒siRNA筛选质粒,继而针对AⅣ各亚型核蛋白基因（NP）的保守序列,设计合成三对shRNA,并退火接入带有PolⅢH1启动子的干涉质粒（pSUPER-basic-H1）,分别命名为:pSUPER-siNP1、pSUPER-siNP2、pSUPER-siNP3。重组质粒经双酶切鉴定并测序确认。将此干涉质粒与NP基因筛选质粒pL-NP-EGFP（NP/EGFP infusion gene）共转染鸡胚成纤维细胞,较其他两个干涉质粒,pSUPER-siNP3高效抑制了NP基因的表达,为进一步确认比较此重组质粒对AⅣ的抑制,本实验进行了禽流感hemagglutination（HA）滴度和TCID₅₀测定,重复三次均获得相似结果,pSUPER-siNP3转染组H9N2的TCID₅₀分别降为:10^-5.00/0.1 mL;10^-5.16/0.1mL;10^-5.28/0.1mL;HA效价降为:1:4。而未转染干涉质粒禽流感病毒对照组TCID₍（50）为:10^-8.50/0.1 mL,HA效价为:1:256。利用该高效干涉片段本实验构建了pLenti6-siNP3-EGFP慢病毒表达载体,并进一步确认比较了慢病毒表达质粒的干涉效果:pL-NPi-EGFP转染组H9N2的TCID₅₀降为:10^-5.16/0.1 mL,HA效价降为:1:4;而未转染干涉质粒禽流感病毒对照组H9N2的TCID₅₀为:10^-8.33/0.1 mL,HA效价为:1:256。最后将慢病毒表达载体与辅助质粒共转染293 FT细胞生产病毒颗粒。将病毒浓缩后胚下腔显微注射转染鸡胚,孵化率达10%（12/120）,结果在检测的12只受体鸡胚胎中,有4只发生嵌合。