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瑞香科（Thymelaeaceae）瑞香属植物芫花（Daphne genkwa Sieb.et Zucc）主要分布于我国长江、黄河两岸。《神农本草经》中记载芫花花蕾可入药,性温,味苦、辛,有毒,归肺、脾、肾经,常用于治疗肿胀、胸腹积水、痰积、疥疮等症。现代研究表明芫花中含有丰富的瑞香烷型二萜,具有良好的抗肿瘤活性,本论文对芫花的石油醚部位进行系统的化学研究,并筛选其抗肿瘤活性。1.化学成分研究采用现代分离纯化技术（XDA-7大孔树脂柱、MCI柱、Sephadex LH-20凝胶柱、硅胶柱和半制备液相色谱柱）、波谱手段（1D和2D NMR、HR-ESI-MS、IR、UV、CD、比旋光）和计算ECD分离鉴定了33个单体化合物,并确定了新化合物1-7的绝对构型。其中新化合物7个（1-7）,均为瑞香烷型二萜,已知化合物26个,包括瑞香烷型二萜化合物15个（8-22）,巴豆烷型二萜化合物1个（23）,半日花烷型化合物1个（24）,黄酮类化合物1个（25）,木脂素类化合物2个（26和30）,双香豆素类化合物1个（27）,甾醇类化合物1个（28）,肽类化合物1个（29）,脂肪酸类化合物2个（31和32）,酯类化合物1个（33）。2.抗肿瘤活性研究用MTT法对分离得到的22个瑞香烷型化合物进行抗肿瘤（SW620、Lo Vo、RKO、He La、MCF-7、SAOS-2）活性初筛,结果显示化合物1、12、13和19对六种肿瘤细胞均有抑制作用,IC50范围为2.96-24.5μM之间,其中化合物1抑制SW620细胞生长的IC50为2.96μM,有明显的抗肿瘤活性。对化合物1诱导结肠癌细胞SW620凋亡的机制进行研究。用AO/PI双染,空白组呈现绿色核质均匀的完整细胞形态,给药组随药物浓度增加,细胞膜皱缩破裂,核染色质固缩呈圆珠状并被染为红色,出现凋亡小体。Annexin V-FITC/PI染色后流式检测凋亡比例,在1/4 IC50浓度时凋亡细胞数量增加,随着药物浓度增加,凋亡细胞比例也在上升,在4倍于IC50浓度时达到了97%,与染色结果吻合。Western blot检测凋亡相关蛋白的表达,结果显示抗凋亡蛋白Bcl-2表达减少,促凋亡蛋白Bax表达增加,下游Cleaved caspase-9,Cleaved caspase-3和Cleaved caspase-PARP表达增加,化合物1可能是通过线粒体凋亡通路诱导SW620细胞凋亡。另一方面对化合物1抑制结肠癌细胞SW620增殖的作用机制进行研究。采用流式细胞仪检测细胞PI染色结果,不同浓度给药组与空白组相比,G0/G1期细胞均明显增加,S期和G2/M期细胞减少,细胞有丝分裂阻滞在G0/G1检查点。PI3K/Akt/mTOR通路是细胞增殖的经典通路,前人的研究也表明同类型化合物通过此通路抑制结肠癌细胞增殖。本研究用Western blot检测药物作用下该通路标志性的蛋白表达的变化,结果显示p-PI3K、p-Akt和p-mTOR表达下调,表明化合物1能抑制PI3K/Akt/mTOR通路重要蛋白磷酸化,起到抗增殖作用。综上所述,本研究从芫花中分离到33个单体化合物,包括22个瑞香烷型二萜和11个其他类型化合物,其中化合物1-7为新化合物。22个瑞香烷型二萜中化合物1、12、13和19抗肿瘤活性较好,其中化合物1能明显抑制结肠癌细胞SW620生长,作用机制可能与PI3K/Akt/mTOR通路诱导的细胞凋亡和抑制细胞增殖有关。