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目的:研究水蛭素和凝血酶对hRPE细胞生长的影响,以及水蛭素对凝血酶诱导的人视网膜色素上皮细胞的ROCK及VEGF表达的影响。 方法:实验分为4组,分别是空白组,水蛭素干预组,凝血酶干预组,凝血酶联合水蛭素干预组,利用MTT研究各组 hRPE生长的影响,利用Q-PCR和western-blot研究ROCK及VEGF基因和蛋白在各个时间点的表达。 结果:⑴加凝血酶孵育细胞,80U/ml、60U/ml、50U/ml、40U/ml、20U/ml、15U/ml、10U/ml、5U/ml、2.5U/ml各浓度组间比较,40U/ml浓度培养的细胞吸光度显著高于80U/ml、60U/ml、50U/ml、20U/ml浓度组及对照组;80U/ml、60U/ml、2.5U/ml浓度组细胞增殖率小于1,抑制率大于0,50U/ml、40U/ml、20U/ml、15U/ml、10U/ml、5U/ml浓度组细胞增殖率大于1,抑制率小于0。加水蛭素孵育细胞,40U/ml、20U/ml、10U/ml、5U/ml、1U/ml各浓度组间比较,5U/ml浓度培养的细胞吸光度显著高于40U/ml浓度组及对照组,高于其它浓度组,20U/ml、10U/ml、5U/ml、1U/ml浓度组细胞增殖率大于1,抑制率小于0,40U/ml浓度组细胞增殖率小于1,抑制率大于0;加水蛭提取液孵育细胞,1mg/ml、2mg/ml、2.5mg/ml、5mg/ml、10mg/ml、25mg/ml、50mg/ml、64mg/ml各浓度组细胞吸光度都显著低于对照组,各浓度组细胞的增殖率都小于1,抑制率都大于0。⑵VEGF基因检测结果:4个时间点各组组间对比。与空白组对比,凝血酶干预组hRPE细胞VEGF的基因表达在12h、24h、48h显著上调,在72h上调;水蛭素干预组hRPE细胞VEGF的基因表达在12h、24h下调,在48h、72h显著下调;凝血酶+水蛭素干预组hRPE细胞VEGF的基因表达在12h、24h显著上调,在48h、72h显著下调;与水蛭素干预组对比,凝血酶干预组 hRPE细胞 VEGF的基因表达在12h、24h、48h、72h显著上调;凝血酶+水蛭素干预组hRPE细胞VEGF的基因表达在12h、24h显著上调,在48h上调,在72h显著下调;与凝血酶干预组对比,凝血酶+水蛭素干预组hRPE细胞VEGF的基因表达在12h、24h显著上调,在48h、72h显著下调;每组4个时间点前后对比,空白组,与12h对比,hRPE细胞VEGF的基因表达在24h、48h、72h有显著上调;与24h对比,hRPE细胞VEGF的基因表达在48h、72h有显著上调;与48h对比,hRPE细胞VEGF的基因表达在72h有下调;水蛭素干预组,与12h对比,hRPE细胞VEGF的基因表达在24h、48h、72h有显著上调;与24h对比,hRPE细胞VEGF的基因表达在48h、72h有显著上调;与48h对比,hRPE细胞VEGF的基因表达在72h有上调;凝血酶干预组,与12h对比,hRPE细胞VEGF的基因表达在24h有上调,48h、72h有显著上调;与24h对比,hRPE细胞VEGF的基因表达在48h、72h有显著上调;与48h对比,hRPE细胞VEGF的基因表达在72h有显著下调;凝血酶+水蛭素干预组,与12h对比,hRPE细胞VEGF的基因表达在24h、48h有显著上调,72h有上调;与24h对比,hRPE细胞VEGF的基因表达在48h、72h有显著下调;与48h对比,hRPE细胞VEGF的基因表达在72h有下调。VEGF蛋白检测结果:与空白组对比,凝血酶干预组,hRPE细胞VEGF的蛋白表达在12h、24h、48h、72h均上调;水蛭素干预组,hRPE细胞VEGF的蛋白表达在12h、24h、48h均下调,72h上调;凝血酶+水蛭素干预组,hRPE细胞VEGF的蛋白表达在12h、24h、48h、72h均上调。⑶ROCK基因检测结果。4个时间点各组组间对比:与空白组对比,凝血酶干预组,hRPE细胞ROCK的基因表达在12h、24h显著上调,在48h、72h下调;水蛭素干预组,hRPE细胞ROCK的基因表达在12h、48h、72h显著下调,在24h显著上调;凝血酶+水蛭素干预组,hRPE细胞ROCK的基因表达在12h、24h、72h显著上调,在48h显著下调;与水蛭素干预组对比,凝血酶干预组hRPE细胞ROCK的基因表达在12h、24h、48h、72h显著上调;凝血酶+水蛭素干预组 hRPE细胞ROCK的基因表达在12h、24h、72h显著上调,在48h上调;与凝血酶干预组对比,凝血酶+水蛭素干预组hRPE细胞ROCK的基因表达在12h上调,在48h显著下调,在72h显著上调。⑷每组4个时间点前后对比。空白组,与12h对比,hRPE细胞ROCK的基因表达在24h上调,48h、72h显著上调;与24h对比,hRPE细胞 ROCK的基因表达在48h、72h显著上调;与48h对比,hRPE细胞ROCK的基因表达在72h显著下调;水蛭素干预组,与12h对比,hRPE细胞ROCK的基因表达在24h、72h显著上调,48h下调;与24h对比,hRPE细胞ROCK的基因表达在48h、72h显著下调;与48h对比,72h显著上调;凝血酶干预组,与12h对比,hRPE细胞ROCK的基因表达在24h、48h、72h显著上调;与24h对比,hRPE细胞ROCK的基因表达在48h上调,在72h显著下调;与48h对比,hRPE细胞ROCK的基因表达在72h显著下调;凝血酶+水蛭素干预组,与12h对比,hRPE细胞ROCK的基因表达在24h、72h显著上调,在48h显著下调;与24h对比,hRPE细胞ROCK的基因表达在48h显著下调,在72h上调;与48h对比,hRPE细胞ROCK的基因表达在在72h显著上调。ROCK蛋白检测结果:与空白组对比,凝血酶12h、24h、48h、72h能增加ROCK蛋白的表达;而水蛭素干预的hRPE细胞ROCK蛋白的表达在12h和24h上调,在48h下调,到72h表达上调;凝血酶联合水蛭素干预的hRPE的ROCK蛋白表达在12h到24h上调,48h、72h下调。 结论:各浓度凝血酶对hRPE都具有促进增殖的作用,40U/ml作用显著,20U/ml、10U/ml、5U/ml、1U/ml的水蛭素对hRPE具有促进增殖的作用,5U/ml作用显著,40U/ml水蛭素对hRPE具有抑制增殖的作用。水蛭提取液对细胞增殖具有显著抑制作用。水蛭素能够抑制hRPE细胞VEGF的表达,凝血酶能够促进 hRPE细胞 VEGF的表达,同时,水蛭素能够抑制凝血酶诱导的 hRPE细胞VEGF的表达。水蛭素能够抑制hRPE细胞ROCK的表达,凝血酶能够促进hRPE细胞ROCK的表达,水蛭素对于凝血酶诱导的hRPE细胞ROCK的表达干预作用不明显。