目的:胰腺癌作为恶性程度较高的肿瘤类型,预后很差,生存质量堪忧。肥胖与胰腺癌关系密切,除引起全身慢性炎症反应等促癌作用外,肿瘤微环境中脂肪细胞与胰腺癌细胞对话发挥生物学功能引起动态变化,对胰腺癌侵袭和转移过程亦有重要的影响,但具体机制不明。方法:通过收集临床胰腺癌患者和健康人血清外泌体样本,利用qPCR分析外泌体linc-ROR的差异表达水平。首先使用透射电子显微镜观察超速离心法PBS洗涤后所提取的外泌体镜下微观形态,粒径浓度分析技术测算超速离心法提取的外泌体的直径和浓度范围,免疫印迹法检测外泌体表面蛋白标记物;RNase A和Triton X-100检测外泌体结构的稳定性。构建linc-ROR慢病毒质粒转染胰腺癌细胞作为后续共培养实验的稳转细胞系,将人胚胎胰腺组织来源细胞(正常胰腺细胞)所分泌的外泌体linc-ROR作为对照,在高表达外泌体linc-ROR的胰腺癌细胞PANC-1中下调linc-ROR表达水平,在低表达外泌体linc-ROR的胰腺癌细胞系BxPC-3中上调linc-ROR表达水平。采用Transwell培养小室分别将各组胰腺癌细胞与脂肪细胞3T3-L1共培养,通过荧光标记外泌体后,观察脂肪细胞不同时间段内摄取胰腺癌细胞来源外泌体的积聚浓度,油红O脂肪染色了解脂肪细胞形态改变、发育成熟能力,显微镜观察胰腺癌细胞形态学改变,qPCR和Western blot法等检测胰腺癌细胞在linc-ROR—HIF-1α—ZEB1正反馈环路中各相关因子的表达水平差异、成熟脂肪细胞分子标记物和成纤维样细胞分子标记物表达水平变化,划痕实验、Transwell、克隆形成、实时无标记细胞分析技术、Edu实验等功能实验检测共培养对胰腺癌细胞增殖、侵袭、迁移能力的影响。最后进行裸鼠体内成瘤实验验证linc-ROR相关的共培养微环境对胰腺癌细胞增殖能力的影响。结果:linc-ROR在胰腺癌患者血清外泌体表达水平明显高于健康人,鉴于超速离心法分离出的血清外泌体linc-ROR表达稳定,可作为胰腺癌早期诊断评估的新型肿瘤标志物。多种实验方法鉴定证实超速离心法提取的胰腺癌来源细胞外囊泡为直径在120nm左右的外泌体,结构稳定,内容物短时间内不易降解损耗。脂肪细胞具有短时间内摄取胰腺癌细胞来源外泌体linc-ROR的能力,并表现为时间相关性。脂肪细胞在摄取外泌体linc-ROR后形态学发生明显改变,且成熟脂肪细胞分子标记物表达水平降低,成纤维样细胞分子标记物表达水平增高。胰腺癌细胞与脂肪细胞对话后,胰腺癌细胞所释放的外泌体中linc-ROR含量更高,共培养微环境中linc-ROR的增多促进脂肪细胞的去分化,进而激活胰腺癌细胞HIF-1α/ZEB1通路表达,同时影响胰腺癌细胞的生物学功能和特性,包括增殖、侵袭以及迁移能力等,促进胰腺癌细胞在上皮-间质转化方面发生改变。裸鼠体内成瘤实验证实胰腺癌细胞与脂肪细胞共培养微环境以及外泌体linc-ROR可促进胰腺癌细胞增殖。结论:我们的研究证实,胰腺癌细胞来源外泌体linc-ROR可促进脂肪细胞向成纤维样细胞去分化,也抑制了脂肪细胞的诱导发育成熟过程,导致其发育迟缓甚至不能发育成熟,出现异型性。胰腺癌与脂肪细胞共培养的微环境进一步促进外泌体linc-ROR释放,继而通过linc-ROR—HIF-1α—ZEB1正反馈环路调控胰腺癌细胞和脂肪细胞对话,不同程度的影响胰腺癌细胞上皮间质转化现象的发生。同时鉴于外泌体作为细胞外囊泡拥有双层脂质包裹体结构的稳定性,胰腺癌患者血清外泌体linc-ROR可作为新的诊断标志物,也为研究胰腺癌转移机制及临床诊治提供思路。