饲料中添加粘红酵母对凡纳滨对虾益生效果影响研究

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粘红酵母作为一类安全、高效的益生菌在对虾养殖中已有相当应用报道,但其益生作用机理仍有待完善与深入研究。本论文以凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)为研究对象,通过拌料投喂不同剂量和不同处理形式的粘红酵母,分析其生长性能、消化酶活性、肠道菌群组成、非特异性免疫及其相关免疫基因表达情况,以探究粘红酵母对凡纳滨对虾的益生作用机理;通过对所选粘红酵母进行传代培养,探究传代对粘红酵母生理生化能力和益生作用的影响,探究粘红酵母的工业化应用潜力。为研究饲料中添加粘红酵母对凡纳滨对虾生长性能、抗感染能力和肠道微生物组成的影响,将粘红酵母冻干粉按0(CG,对照组)、0.025%(LA)、0.05%(MA)、0.1%(HA)四个浓度添加入商品饲料中,饲喂凡纳滨对虾40天。结果显示,LA、MA、HA实验组特定生长率分别达到4.20、3.80和3.63,显著高于对照组的3.17;实验组和对照组间养殖存活率无显著差异;投喂组过氧化氢酶(CAT)和酸性磷酸酶(ACP)活性基本随投喂时间增加而增加,LA和HA两组总超氧化物歧化酶(SOD)活性呈先下降后上升趋势,在对照组则不断上升,实验结束时,LA组四种免疫酶活性显著高于对照组;哈维氏弧菌浸泡感染后(96h)对照组累积死亡率达到81.67%,显著高于实验组的23.67%(LA)、25.00%(MA)和23.67%(HA);添加粘红酵母在科、属的水平上改变了对虾肠道微生物的组成,降低了肠道微生物多样性,抑制了假单胞菌属和黄杆菌属在肠道中的丰度,提高了红杆菌属和支原体属在肠道中的丰度;随着添加浓度的上升,黏着杆菌属和鲁杰氏菌属的丰度下降。研究表明,在本实验条件下,投喂粘红酵母冻干粉能够有效提高凡纳滨对虾的生长性能和抗病能力,并可有效抑制部分条件致病菌在肠道内的生长。为研究粘红酵母对凡纳滨对虾的益生作用机理,将粘红酵母分别以活菌(LB)、灭活菌(DB)、破碎物(CE)和对照组(CG)添加入凡纳滨对虾商品饲料中,饲喂凡纳滨对虾40天。结果显示,灭活组和破碎物组特定生长率显著高于活菌组和对照组;添加粘红酵母在科、属的水平上改变了凡纳滨对虾肠道微生物的组成,降低了肠道微生物多样性,对照组和活菌组中弧菌属为组内优势种,灭活组和破碎物组红细菌属变为组内优势种;整个实验期间各组间IMD相对表达量无显著差异,灭活组和破碎物组crustin相对表达量较活菌组和对照组显著上调,灭活组penaeidin-3a相对表达量较活菌组和对照组显著上调,灭活组、活菌组和破碎物组的LZM相对表达量大幅下调。研究表明,在本实验条件下,采用灭活菌和破碎物的投喂方式更能发挥粘红酵母益生能力,粘红酵母发挥益生能力可能是通过菌体内的部分活性物质,而非酵母本身的活性。为探究传代对粘红酵母生理生化能力和益生作用的影响,探究粘红酵母的工业化应用潜力,对粘红酵母进行传代培养,分析粘红酵母生理生化性质的变化,并使用不同传代数的粘红酵母破碎物添加入凡纳滨对虾商品饲料中,饲喂凡纳滨对虾40天。结果显示,粘红酵母的最佳培养时间为40h,培养48h后第11代和21代酵母细胞活性分别下降26%和47%;培养18h后絮凝能力分别增强38.90%和89.49%;传代对粘红酵母体内氨基酸和脂肪酸含量影响不显著;5代和10代粘红酵母形态变化较小,但表面出现轻微褶皱,之后随着传代数的增加,出现褶皱的比例增大,褶皱进一步加深,酵母细胞聚集成团现象明显;投喂酵母的实验组凡纳滨对虾特定生长率显著提高;肠道微生物总OTU数目下降,弧菌属、鲁杰氏菌属、黄杆菌属和Candidudatus Bacilloplasma丰度下降;两个投喂组IMD表达量较对照组上调,penaeidin-3a和crustin相对表达量显著上调,proPO相对表达量下调,LZM相对表达量显著下调。研究表明,在本实验条件下,传代对粘红酵母胞内氨基酸和脂肪酸含量影响不显著,对细胞形态影响较大,会降低粘红酵母细胞活性,增强絮凝能力;传代会影响粘红酵母内活性物质的益生效果,第1代粘红酵母的综合益生效果更佳,第21代粘红酵母益生效果有一定衰减,但仍优于不投喂酵母的实验组。
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