目的1.建立粗糙龙胆地上部分总黄酮及指标性成分——芒果苷、异荭草素、异牡荆素的含量测定方法,筛选出粗糙龙胆地上部分黄酮类成分的最佳提取和富集工艺。2.建立富集物的指纹图谱,测定富集物中总黄酮及指标性成分的含量,以控制富集物质量。方法1.以芦丁为对照品,采用紫外-可见分光光度法,建立了三氯化铝显色测定粗糙龙胆地上部分总黄酮的含量测定方法;利用高效液相色谱法,以乙腈-0.1%甲酸水进行梯度洗脱,同时测定芒果苷、异荭草素、异牡荆素的含量。2.以总黄酮量与生药量的比值为指标,对提取溶剂(40%、50%、60%、70%、80%、90%乙醇)进行单因素考察,筛选最佳乙醇浓度;通过L9(34)正交设计表,以料液比、提取时间、提取次数为因素,进行正交设计试验,筛选出粗糙龙胆地上部分黄酮类成分的最佳提取工艺。3.以总黄酮在大孔吸附树脂上的吸附率、解吸率为指标,通过筛选树脂型号、考察总黄酮的吸附特性及解吸特性,优选出黄酮类成分的最佳富集工艺。4.利用HPLC技术,建立了10批富集物的指纹图谱;参考已建立的含量测定方法,对粗糙龙胆地上部分富集物中的总黄酮及指标性成分进行了含量测定,用以控制富集物的质量。结果1.本文分别采用UV-vis光度法及HPLC色谱法,建立了粗糙龙胆地上部分总黄酮及指标性成分——芒果苷、异荭草素、异牡荆素的含量测定方法。方法学考察结果精密度、稳定性、重复性的 RSD值在0.22%～1.72%之间,回收率在98.23%～101.71%之间。2.确定了粗糙龙胆地上部分黄酮类成分的最佳提取工艺:取粗糙龙胆地上部分粉末(40目),以料液比为1:16的80%乙醇回流提取2次,每次60min。3.确定了总黄酮的最佳富集工艺:将生药浓度为1.0g/mL的提取液,按石油醚(mL):提取液(mL)为3:1的比例萃取2次后,弃去石油醚液,取提取液,按提取液(mL):树脂(g)=1:3的比例以1BV/h的体积流量通过装有AB-8型大孔吸附树脂的玻璃柱,先后用5BV水、5BV10%乙醇洗脱,最后收集7BV50%乙醇洗脱液,于50℃下减压浓缩、蒸干,制得总黄酮含量为52.63%的富集物,总黄酮转移率为80.3%。4.建立了10批富集物在260nm处的HPLC指纹图谱,标示了16个共有峰,指认了其中的芒果苷、异荭草素、异牡荆素3个色谱峰。以峰面积最大的芒果苷色谱峰作为参照峰,计算各共有峰相对保留时间的精密度、稳定性、重复性RSD值在0.26%以下,相对峰面积的的精密度、稳定性、重复性RSD值在1.97%以下。对10批样品进行色谱指纹图谱分析,建立富集物的共有模式,利用“相关系数”法和“夹角余弦”法计算样品与共有模式之间的相似度,结果相似度均在 0.99以上。测得富集物中总黄酮、芒果苷、异荭草素和异牡荆素的含量分别为52.70%、9.85%、4.75%、1.47%。结论本实验建立了粗糙龙胆地上部分总黄酮及指标性成分——芒果苷、异荭草素、异牡荆素的含量测定方法,方法学考察结果表明其可靠性、重复性及稳定性好,可用于粗糙龙胆地上部分总黄酮及其指标性成分含量测定;优选出了粗糙龙胆地上部分黄酮类成分的最佳提取、富集工艺;建立了10批富集物的指纹图谱,测定了3批富集物中总黄酮及指标性成分的含量,可用于富集物的质量控制。为进一步开发粗糙龙胆地上部分新资源提供了基础研究资料。