细菌性食源性疾病依然是全球主要的食品安全问题,建立快速的食品致病菌检测方法对控制农产品和食品从生产、运输、仓储、口岸通关、销售和消费各个环节的生物性风险至关重要。近年来食品中细菌的快速检测方法发展较快,种类繁多,而传统方法最大的缺点是耗时较长,且操作繁琐,不能快速检测出污染的样品,不能及时发现并控制污染源或检测灵敏度难以达到要求。本研究通过组合一步法快速提取DNA技术配套便携式实时荧光PCR仪,形成一个便携式微生物快速检测集装箱,便携式设备由于其固有的灵活性使检测不仅限于实验室中,而可以随时随地进行,提高检测的时效性和便利性,为小空间、口岸、偏远地区、现场快速检测等场景的应用提供良好的技术支撑,使便携式荧光定量PCR技术拥有更大的发展空间。分别以克罗诺杆菌属、沙门氏菌属、副溶血性弧菌属的标准菌株为研究对象,建立其快检体系,以实现对目标菌株的快速检测。具体研究内容如下:（1）对DNA一步法快速提取技术进行优化及对快速实时荧光定量PCR仪进行研究,分别以克罗诺杆菌属（Cronobacterium）、沙门氏菌属（;Salmonella）、副溶血性弧菌属（Vibrio parahaemolyticus）标准菌株为研究对象,对其进行培养且提取其DNA为阳性样本,建立目标菌株的快速检测体系,以传统煮沸法为对照,通过优化建立快速实时荧光PCR反应程序,结果显示:建立的一步法DNA提取技术检测的灵敏度与传统的煮沸法等同,且建立的快速实时荧光定量PCR法可将传统的检测时间由82 min缩短至30 min左右,将整个检测过程所需时间控制在40min左右,以满足现场检测快速便捷的检测需求,设计优化的速测体系具有时效性、便利性、快速简便、灵敏度较高等优势,在口岸食源性病源微生物现场快速检测方面具有较好的应用前景。（2）以市售样品乳粉中克罗诺杆菌属、鸡肉中沙门氏菌属、水产品中副溶血性弧菌属为靶标,进行快检法与国标法检测,比较分析发现:快检法的检测结果与国标法保持一致,且快检法缩短了检测时间,因此,说明本研究建立的快检体系适用于食品中致病菌的快速检测,为食源性致病菌的检测提供技术支持。（3）将本研究建立的快检体系集成便携式微生物快速检测箱,并对该快检箱进行重复性、稳定性及试剂的保存期进行检测,研究结果表明:快检箱重复性、稳定性均良好,该试剂在-20℃可避光保存6个月,且该快检箱操作简单,方便携带,适用于食源性致病菌的现场检测。