目的和意义:卵巢癌是临床常见的妇科恶性肿瘤,以起病隐匿和预后差为特征。现有的肿瘤标志物缺乏良好的特异性和敏感性,很难对上皮性卵巢癌做出早期诊断。由于早期发现困难,而且易发生多途径、多部位的转移,故临床治疗效果多不理想,5年存活率较低。因此,寻找一种新的、敏感而特异的肿瘤标志物已成为妇科肿瘤学界研究的热点。肿瘤抗原在本质上是肿瘤细胞在癌变和恶性生长过程中产生的新的抗原性物质。这些物质有些是正常细胞基因组中某些基因的突变产物,有些则是正常细胞不表达的沉默基因的产物,另外还有些物质在正常组织低表达而在肿瘤组织高表达。低表达时免疫原性弱,不能刺激机体产生免疫应答,而高表达时则可诱导产生致敏淋巴细胞和/或形成抗体。因此寻找和发现上皮性卵巢癌的肿瘤特异性抗原和/或相关抗原,将其作为肿瘤标志物,用于早期诊断和治疗具有十分重要的理论和实际意义。本研究拟通过构建人上皮性卵巢癌组织cDNA表达文库,利用SEREX技术筛选文库,来寻找卵巢癌相关抗原,以期获得中国人卵巢癌相关抗原分子,为卵巢癌早期诊断和治疗奠定基础。材料和方法:采用初诊卵巢癌患者新鲜癌组织,抽提总RNA,分离纯化mRNA,并以此为模板合成第一链cDNA,用置换法合成第二链cDNA。双链cDNA经末端削平、EcoR I接头连接、Xho I酶切、过柱分级分离,除去〈400bp片段。收集符合需要的cDNA片段与噬菌体ZAP Express载体连接,经体外包装获得人卵巢癌组织cDNA表达文库。测定原始文库滴度,进行蓝白斑筛选以确定文库的重组率。原始文库不稳定,立即进行扩增,用同法测定扩增文库滴度。随机挑取克隆经PCR扩增鉴定插入片段大小。然后应用SEREX技术筛选所构建的卵巢癌组织cDNA表达文库。首先抽取同一患者的外周静脉血分离血清,经细菌XLl-Blue裂解物预吸收处理后,与吸附有噬菌斑的NC膜共孵育,洗涤后,NC膜再与羊抗人IgG抗体结合,最后用DAB显色,确定有免疫反应的克隆。同法继续进行第二轮筛选和第三轮筛选,直至得到一致的免疫阳性重组噬菌体。阳性克隆进行测序、生物学信息分析。