慢性低度炎症状态是肥胖和2型糖尿病存在重要的发病机制之一,即在肥胖2型糖尿病患者血清中多种脂肪细胞炎症因子和炎症标志物分泌和表达明显升高,如白细胞介素-6、肿瘤坏死因子、单核细胞趋化蛋白-1、Ⅰ型纤溶酶原激活抑制因和抵抗素等。这些炎症因子可以引发胰岛素抵抗,还可以使胰岛β细胞受损坏。它们在调节糖脂代谢紊乱、血管生物学及肥胖及治疗相关疾病如2型糖尿病、肥胖症、高血压、动脉粥样硬化、心血管疾病发生中发挥着重要作用。抗炎因子脂联素可以激活AMPK通路,提高胰岛素敏感性。因此,对抗脂肪组织的炎症状态或提高抗炎因子有助于改善胰岛素抵抗和2型糖尿病的治疗。清热药黄连和补气药人参是中医临床治疗2型糖尿病的常用药材,二者配伍使用,可降低糖尿病大鼠的血糖和胰岛素水平,同时降低血清游离脂肪酸,保护胰岛p细胞形态和功能,显示明显改善胰岛素抵抗的作用。小檗碱和人参皂苷分别是黄连和人参中主要的有效成分。虽然两味中药性味有所不同,功效迥异,但两种化合物对机体糖脂代谢均具有显著的调节作用。在前期的研究中我们发现小檗碱对脂肪细胞和肥胖小鼠的炎症因子和炎症通路具有明显的抑制作用,但人参皂苷Rb1以及其与小檗碱合用对脂肪细胞炎症因子分泌和炎症信号通路的影响并不清楚。目的：1)探讨小檗碱和人参皂苷Rb1合用对3T3-L1脂肪细胞因子TNF-α、IL-6、MCP-1及Resisitin和抗炎因子脂联素mRNA表达水平的影响。2)探寻小檗碱和人参皂苷Rb1对3T3-L1脂肪细胞炎症信号通路中IKK-β.JNK蛋白的表达和IKK-β(ser181)、JNK磷酸化水平的影响。3)观察小檗碱和人参皂苷Rb1对3T3-L1脂肪细胞中蛋白NF-κB (p65)向细胞核内的转位的影响。更好的为小檗碱和人参皂苷Rb1在防治2型糖尿病及其相关疾病方面提供实验依据及临床运用指导。方法：第一部分小檗碱和人参皂苷Rb1合用对3T3-L1脂肪细胞炎症因子表达和分泌的影响采取Trizol法抽提总RNA,采用实时定量PCR检测肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素6(IL-6)、抵抗素(Resistin)、脂联素、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)mRNA的表达。3)分别给药正常鼠和小鼠糖尿病自发突变纯合子,14天后,禁食10小时,测量空腹血糖和血清胰岛素,用戊巴比妥钠(30mg/kg)麻醉。收集组织和血清样本。采用酶联免疫吸附法(ELISA法)检测YNF-α、脂联素含量。第二部分小檗碱和人参皂苷Rb1对3T3-L1脂肪细胞炎症信号通路信号蛋白作用的影响采用蛋白免疫印迹(westem blotting)法检测小檗碱和人参皂苷Rb1对3T3-L1脂肪细胞IKK-β、JNK蛋白的表达和IKK-p(ser181)、JNK磷酸化水平的作用。第三部分小檗碱和人参皂苷Rb1对3T3-L1脂肪细胞NF-κB(p65)蛋白向细胞核内转位的影响采用免疫荧光标记法,在激光共聚焦显微镜下观察小檗碱和人参皂苷Rb1对3T3-L1脂肪细胞NFκB p65蛋白向细胞核内转位的影响。结果：第一部分小檗碱和人参皂苷Rbl合用对3T3-L1脂肪细胞炎症因子表达和分泌的影响1)小檗碱和人参皂苷Rb1对基础状态下脂肪细胞炎症因子表达的影响小檗碱组中小檗碱处理24h后,脂肪细胞TNF-α、IL-6、Resistin, MCP-1mRNA的表达与对照组比较显著降低(P<0.01),但脂联素的表达未见明显变化；人参皂苷Rbl组人参皂苷Rbl仅上调了脂联素的表达(P<0.05),对TNF-α、IL-6、Resistin、MCP-1的表达未产生显著影响；两药合用后,与对照组比较,TNF-α、IL-6、Resistin、MCP-1以及脂联素的表达均无显著变化,作为阳性药物的Rsg明显地下调各炎症因子的表达(P<0.01),上调脂联素的表达水平(P<0.01)。2)小檗碱和人参皂苷Rb1对TNF-α刺激下脂肪细胞炎症因子表达的影响在10μmol/L TNF-α刺激下所测炎症因子的表达显著上升,脂联素的表达水平下降(P<0.01)。小檗碱能够显著地抑制TNF-α刺激下上调的TNF-α、IL-6、Resistin和MCP-1的表达水平(P<0.01),下调的脂联素表达也得到部分恢复(P<0.05)；而Rb1仅抑制了TNF-α、MCP-1的表达(P<0.01),同时部分恢复脂联素的表达(P<0.05),但对IL-6、Resistin的表达未见显著的影响；Ber+Rb1与单用Rb1类似,仅降低了TNF-α、MCP-1的表达(P<0.01),对IL-6、Resistin的表达下调未见显著性,同时对脂联素的表达也未见影响。3)小檗碱和人参皂苷Rb1合用对小鼠体内胰岛素和因子的影响在禁食10小时后,测量的空腹血糖和空腹胰岛素,其中Ber组和Rb1+Ber组有显著性差异(P<0.01)。与正常鼠相比,db/db老鼠在给药14天之后,Ber组和Ber+Rb1组小鼠摄食量和体重减少,附睾和肝脏的比重也明显降低,显著降低了空腹血糖和血清胰岛素,也能够显著地恢复了Adiponectin mRNA的表达(P<0.01)；而Rb1组人参皂苷Rbl处理后,降低了TNF-α mRNA的表达,同时也部分恢复Adiponectin mRNA的表达(P<0.05)。第二部分小檗碱和人参皂苷Rbl对3T3-L1脂肪细胞炎症信号通路信号蛋白作用的比较在TNF-α刺激下,脂肪细胞的JNK和IKK-p的磷酸化激活明显增加,分别给与药物作用后,小檗碱对于激活的JNK和IKK-β有明显的抑制作用,作用与Rsg相当；而人参皂苷Rbl未见明显抑制作用。两药合用IKK-β、JNK的磷酸化水平也未见明显变化。第三部分小檗碱和人参皂苷Rb1对3T3-L1脂肪细胞NF-κB(p65)蛋白向细胞核内转位的影响在TNF-α刺激24小时后,3T3-L1脂肪细胞NF-κB(p65)蛋白有细胞质向细胞核内的转位明显增加,分别给与药物作用后,用10umol/L的小檗碱干预24小时能明显抑制NF-κB(p65)蛋白向细胞核内的转位,10umol/L人参皂苷Rbl以及两药合用对NF-κB(p65)蛋白向细胞核内的转位没有明显的抑制作用。结论：1)在体外小檗碱在基础状态和胰岛素抵抗状态均能下调炎症因子TNF-α、IL-6、Resistin和MCP-1mRNA的表达,也能恢复TNF-α刺激后的脂联素的表达；在体内小檗碱可以减少糖尿病模型小鼠摄食量和体重,附睾和肝脏的比重也明显降低,显著降低了空腹血糖和血清胰岛素。同时明显抑制炎症信号通路中IKK-p、JNK的磷酸化的活化和NF-KB(p65)蛋白向细胞核内的转位。说明小檗碱可能是通过IKK/NF-κB信号通路发挥了调节炎症因子表达和分泌的效果。2)人参皂苷Rbl上调了脂联素的表达,对于炎症因子刺激的TNF-α、MCP-1的表达有一定的抑制作用,但对炎症信号通路中IKK-β、JNK的磷酸化的活化和NF-KB(p65)蛋白向细胞核内的转位无明显影响。说明其可能通过与小檗碱不同的作用信号通路发挥着调节炎症因子表达和分泌的作用。3)小檗碱和人参皂苷Rbl合用对脂肪细胞因子和蛋白的表达和分泌没有明显的作用。但人参皂苷Rbi与小檗碱均有改善糖尿病的作用,说明在分子机制上存在明显差别,同时进一步说明了两者对于炎症状态的作用也不尽相同。