米非司酮对人宫颈癌细胞化疗敏感性的影响及其机理的探讨

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目的:研究化疗药物联合米非司酮(Mifepristone, MIF)在体外对人宫颈腺癌Hela细胞和人宫颈鳞癌 SiHa细胞增殖影响,并探讨其作用机制,以期发现一种通过诱导细胞凋亡来抑制宫颈癌细胞生长的新的联合用药,为扩大米非司酮化疗增敏的用药奠定科学的理论基础。  方法:取对数生长期的Hela、SiHa细胞,以单药及联合用药处理后,MTT测定细胞增殖活性,流式细胞仪(flow cytometry, FCM)分析药物对人宫颈癌细胞的诱导凋亡效应,免疫印迹方法 Western blot检测用药处理前后细胞中P53、Survivin、HPV E6等蛋白表达的变化。  结果:药物在体外作用于细胞一定时间后, MTT法检测细胞的活力,发现不同浓度 DDP、5-Fu对人宫颈癌 Hela、SiHa细胞增殖均有抑制作用(P<0.01),具有量效和时效依耐性。MIF单药结果显示对 SiHa细胞增殖有量效和时效依赖性的抑制作用;对HeLa细胞24h时,溶媒组、低浓度 MIF组(0.625、1.25、2.5、5、10μg/mL)与对照组比较,细胞增殖抑制率差异无统计学意义(P>0.05)。DDP、5-Fu分别联合 MIF可增强它们对 HeLa、SiHa细胞的增殖抑制率(P<0.01);联合用药作用24小时后流式细胞仪分析可见与单用药相比,前者显著提高了细胞的凋亡率(P<0.01),且随着药物浓度的增大,凋亡细胞的比例增加。蛋白表达显示,单用及联合应用均能使细胞中p53蛋白表达上调,呈浓度依赖性,且以联合应用更为显著; Survivin蛋白在不同联合方案中表达不同,两种细胞中DDP联合 MIF组与 DDP单药比较 Survivin蛋白表达上调,而HeLa细胞中5-Fu联合 MIF组 Survivin蛋白表达未见明显差异;HeLa细胞中HPV-E6蛋白随着联合用药剂量的增加表达下调;5-Fu联合 MIF作用于 SiHa细胞后,细胞中Bax蛋白表达逐渐增加,Bcl-2蛋白表达逐渐降低。  结论:(1)在体外,MIF具有抑制人宫颈鳞癌 SiHa细胞增殖的作用,一定条件下(大于10μg/mL或延长作用时间)还可以抑制人宫颈腺癌(Hela)细胞增殖作用;(2) MIF能增强 DDP、5-Fu对宫颈癌 Hela、SiHa细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用;(3) MIF对 Hela细胞增殖抑制和化疗增敏作用可能与上调 P53蛋白,下调 HPV16-E6蛋白有关, MIF增敏 DDP可能还与上调 Survivin蛋白表达有关;(4)MIF对 SiHa细胞增殖抑制和化疗增敏作用可能与上调 P53、Survivin、Bax蛋白,下调 Bcl-2蛋白有关。
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