AP1/FUL亚家族成员鉴定及PrupeFUL4在桃果实成熟软化中的功能分析

来源 :西北农林科技大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wumingxiaoziwoaini
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AP1/FUL为MADS-box转录因子的一个亚家族,在植物生长和发育中起着重要作用。已有研究证实PPERFUL基因可以调控桃果实的核裂过程,但其在桃果实成熟软化过程中的调控机制尚不清楚。本研究首先在桃基因组中鉴定出AP1/FUL亚家族5个成员;然后分析其在不同组织、果实发育不同阶段及不同质地桃果实成熟软化期的表达特性,鉴定出可能参与桃果实成熟软化的AP1/FUL亚家族成员;其次以‘布目早生’为试验材料,通过对果实中PrupeFUL4基因进行瞬时沉默和过表达,从而研究PrupeFUL4基因在桃果实成熟软化过程中的功能;并进一步利用酵母双杂交试验,筛选可能与PrupeFUL4互作的蛋白,探究其与其它转录因子互作调控桃果实成熟软化的机制。主要取得以下研究结果:(1)通过生物信息学分析在桃基因组中鉴定出5个AP1/FUL亚家族成员,系统进化树分析看出Prupe AP1位于eu AP1进化枝,而其他4个成员位于eu FUL进化枝,因此分别命名为Prupe AP1和Prupe FUL1,2,3,4;和其他的FUL-like蛋白一样,AP1/FUL亚家族成员除了具有MADS-box家族保守结构域之外,在C末端具有高度保守的FUL motif(L/MPPMWL),而Prupe AP1蛋白具有不同的C端motif。(2)AP1/FUL亚家族成员的表达具有明显的组织特异性,Prupe AP1主要在花中表达,Prupe FUL1,2,3主要在叶或根中表达,PrupeFUL4主要在果实和花中表达。在不同溶质果实中,PrupeFUL4在果实第二次膨大期和成熟软化期相对表达量均较高,但在果实成熟软化期的表达量不受乙烯调节剂和ABA调节剂处理的影响。(3)病毒介导PrupeFUL4基因沉默,果肉中PrupeFUL4基因相对表达量显著下调,果实软化受到抑制,同时乙烯生物合成相关基因(Prupe ACO1和Prupe ACS2)、ABA生物合成相关基因(Prupe NCED5)以及细胞壁降解相关基因(Prupe PME3、Prupe Lox1、Prupe EXP2、Prupe PG和Prupeα-Man)也受到不同程度的下调。而果实瞬时过表达PrupeFUL4基因后,显著地促进果实软化,同时成熟软化相关基因的相对表达量也受到不同程度的上调。此外,成熟软化相关基因的启动子区均存在Car G-box作用元件,表明PrupeFUL4转录因子可能通过调控成熟软化相关基因的转录来参与调节果实成熟软化进程。(4)通过酵母双杂交筛库试验筛选出可能与PrupeFUL4互作的蛋白。酵母双杂交点对点验证表明,PrupeFUL4与Prupe SEP1、Prupe SEP2、Prupe SEP3、Prupe OFP5、Prupe GL3和Prupe AGL11蛋白存在互作,而这些蛋白与花的发育和果实的成熟密切相关,因此我们认为PrupeFUL4也可以通过与其他转录因子互作形成异源二聚体或者异源多聚体来调控桃果实成熟软化,但其分子调控机制仍需进一步进行研究。
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