论文部分内容阅读
本文建立了三种药用石斛GC-MS样品制备方法,运用该方法对三种药用石斛试管苗、栽培苗以及石斛加工品枫斗进行分离鉴定,并采用多元统计学方法对数据进行处理与分析,目的是通过研究石斛中糖、醇、有机酸、氨基酸等代谢产物的组成及含量变化,初步构建石斛的代谢谱,并获取对供试样品分型贡献值较大的代谢物信息(VIP),结合统计学t检验P值(P<0.05),找出生物标志物,可作为石斛品种鉴定与质量控制的依据之一。实验建立了药用石斛甲醇/水相的代谢谱分析技术平台,为深入研究石斛药用成分的代谢提供了重要的技术手段。主要的实验结果如下:1、基于气相色谱与质谱联用(GC-MS)技术,对石斛样品甲醇/水相提取物制备方法进行了优化,结果为:超声30min,肟化时间120min,肟化温度37℃,肟化试剂(盐酸羟胺)用量60μL,衍生化时间90min,衍生化温度25℃,衍生化试剂(99%BSTFA+1%TMCS)用量60μL。2、石斛样品甲醇/水相提取物主要为糖类和糖苷类、氨基酸类、脂肪酸类、有机酸类、糖醇类等,氯仿相提取物主要为烷烃类、脂肪酸类、烷醇类等。3、三种药用石斛甲醇/水相提取物代谢谱分析结果如下:(1)在不同品种的石斛试管苗茎(铜皮石斛、铁皮石斛、米斛)中,总含糖量的高低为米斛>铁皮石斛>铜皮石斛,总氨基酸含量也有差异,分别是铁皮石斛>铜皮石斛>米斛。(2)在一至三年生栽培铁皮石斛茎中,总的氨基酸含量变化明显,分别是一年生>两年生>>三年生;在一至四年生栽培米斛茎中,总氨基酸含量三年生茎中最高;比较不同品种栽培石斛,总糖类差异明显,为栽培米斛>>栽培铁皮石斛。(3)在不同品种的石斛加工品枫斗(铜皮枫斗、铁皮枫斗、米斛枫斗)中,总含糖量高低为米斛枫斗>铜皮枫斗>>铁皮枫斗,总氨基酸含量为米斛枫斗≈铁皮枫斗>铜皮枫斗。(4)在不同生产阶段(试管苗、栽培苗、石斛加工品枫斗)的米斛中,总含糖量差异明显,结果为栽培米斛>米斛加工品枫斗>>米斛试管苗。在不同生产阶段的铁皮石斛中,脯氨酸含量差异明显,铁皮石斛试管苗>>铁皮石斛加工品枫斗>铁皮石斛栽培苗。4、三种药用石斛甲醇/水相提取物的生物标志物,结果如下:(1)对不同品种石斛试管苗茎中的代谢物进行了研究,找出的生物标志物是鸟氨酸、柠檬酸。(2)对石斛栽培苗茎中的代谢物进行了研究,其中在不同生长年限的铁皮石斛栽培苗茎中找出了六种生物标志物,分别为甘露糖、半乳糖、氨基甲酸、琥珀酸、肌醇、齐墩果腈。在不同品种(铁皮石斛、米斛)的石斛栽培苗中,生物标志物是蔗糖、D-甘露糖、D-葡萄糖、D-果糖、D-山梨糖。(3)对不同品种石斛加工品枫斗的代谢物进行了研究,找出的生物标志物是蔗糖、D-甘露糖、D-葡萄糖、D-果糖、D-阿洛酮糖、D-塔格糖、琥珀酸、肌醇、丙烯酸、甘油。(4)对不同生产阶段石斛(试管苗、栽培苗、石斛加工品枫斗)的代谢物进行了研究,其中不同生产阶段的铁皮石斛茎中生物标志物是十八酸、十六酸、齐墩果腈、丁二酸、氨基甲酸、L-脯氨酸。不同生产阶段的米斛茎中生物标志物是蔗糖、D-(+)-甘露糖、1-环己烯-1-羧酸、D-(+)-半乳糖。5、对石斛代谢产物的聚类分析和多元统计学分析能够将不同石斛品种区分,为石斛分类提供了新的依据。