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目的:1.从16种化合物中筛选出抗肿瘤活性较好的化合物;2.研究氯化两面针碱的体外抗肿瘤效应及其部分分子作用机理。方法:1.抗肿瘤活性化合物的筛选:MTT法结合光镜下观察,筛选能显著抑制肿瘤细胞增殖的化合物;2.氯化两面针碱对肿瘤细胞周期分布的影响:流式细胞仪检测细胞周期分布的变化;3.G2/M期阻滞相关基因mRNA和蛋白表达的检测:半定量PCR检测氯化两面针碱作用前后肿瘤细胞CyclinB1和cdc2 mRNA表达的改变。实时荧光定量PCR技术检测氯化两面针碱对肿瘤细胞p21和p27 mRNA表达的影响。免疫细胞化学法分析CyclinB1、cdc2、p21和p27蛋白表达的变化;4.氯化两面针碱对肿瘤细胞凋亡的影响:运用Hoechst 33258荧光染料法和电子显微镜观察细胞凋亡的形态学改变;5.氯化两面针碱对肿瘤细胞内活性氧（ROS）的影响:采用流式细胞仪和荧光显微镜分析肿瘤细胞内活性氧的变化。结果:1.抗肿瘤活性化合物的筛选:符合抗肿瘤药物体外活性评价标准的化合物有氯化两面针碱、鹅掌楸碱金、银、铂配合物,白花丹素及其铜、钴配合物。它们的IC50均小于10μg/ml,其中氯化两面针碱活性较强,对人乳腺癌MDA-MB-231、人口腔鳞癌KB及其耐药株KBv200的IC50分别为（2.85±0.45）μg/ml、（2.36±0.22）μg/ml和（2.43±0.19）μg/ml。2.氯化两面针碱对肿瘤细胞周期分布的影响:3μg/ml氯化两面针碱作用12 h后,与0h组相比较,G0/G1期和S期细胞所占比例均明显下降（P＜0.01）,G2/M期细胞数量显著增加（P＜0.01）。且随氯化两面针碱剂作用时间的延长,以上趋势更加明显。到48 h时,G2/M期细胞比例高达70%多,但与24 h相比,无统计学差异（P＞0.05）。这表明氯化两面针碱对细胞有着明显的G2/M期阻滞效应,且阻滞作用高峰在24小时。3.G2/M期阻滞相关基因mRNA和蛋白表达的检测:相对于0 h组,3μg/ml氯化两面针碱作用12 h后,CyclinB1 mRNA相对表达量已有降低（P＜0.05）,cdc2 mRNA和p27 mRNA水平未见变化（P＞0.05）,而p21mRNA立即强表达（P＜0.01）。24 h时,CyclinB1 mRNA水平进一步降低（P＜0.01）,cdc2 mRNA和p27 mRNA水平仍无明显变化（P＞0.05）,而p21表达依然较强（P＜0.01）。到48 h时,CyclinB1 mRNA降至最低水平（P＜0.01）,cdc2 mRNA和p27 mRNA水平基本恒定（P＞0.05）,而p21 mRNA表达基本恢复到0 h组水平。氯化两面针碱作用后,周期相关蛋白的变化与其编码基因的变化基本一致,CyclinB1蛋白表达减弱（P＜0.01）,p21蛋白表达增强（P＜0.01）,而cdc2蛋白和p27蛋白表达无显著变化（P＞0.05）。4.氯化两面针碱对肿瘤细胞凋亡的影响:Hoechst 33258检测凋亡发现,随着氯化两面针碱浓度的增加,细胞凋亡率开始上升。与0μg/ml组相比,有统计学差异的为6μg/ml组和9μg/ml组（P＜0.01）,但9μg/ml组细胞凋亡率又有所下跌;透射电镜下各组凋亡变化程度也符合以上趋势,其中9μg/ml组里可见大量坏死细胞,凋亡细胞减少。由此我们推测氯化两面针碱诱导细胞凋亡可能存在一定的剂量范围,浓度过高时以致肿瘤细胞坏死为主。5.氯化两面针碱对肿瘤细胞内活性氧的影响:一般情况下,肿瘤细胞内ROS水平较高。随着处理细胞的氯化两面针碱浓度增高,ROS明显减弱,在流式结果上表现为峰形左移,即阳性细胞数比例减少,各用药组与0μg/ml相比,有统计学差异（P＜0.01）。以上趋势,在荧光显微镜下表现为荧光强度逐渐减弱,直至模糊不清。结论:1.氯化两面针碱在体外能够降低肿瘤细胞内ROS水平,显著抑制肿瘤细胞的增殖。其作用方式与浓度密切相关,低浓度以G2/M期阻滞为主;中浓度可诱导凋亡;高浓度以致其坏死为主。2.氯化两面针碱引发G2/M期阻滞的机制可能与其下调CyclinB1的转录与表达,上调p21的转录与表达,从而减少成熟促进因子（maturation promoting factor,MPF）的形成有关。