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口腔溃疡(recurrent oral ulceration, ROU)是最常见的口腔粘膜病,患病率高达20%,同时是艾滋病、白塞氏病或者恶性肿瘤最常见的并发症之一,迄今为止尚无十分理想的治疗药物和治疗方案出现。随着传统抗生素或糖皮质激素对ROU干预涌现出的诸多问题,如疗效不理想、副作用多等,中药或天然药物介入ROU的防治无疑是必要和较好的选择。传统中医典籍中曾多次记载了柿叶、柿子防治口疮的临床医案,近年来也有其应用于ROU的临床报道,但目前柿属植物防治ROU的实验研究尚属空白。本研究采用EtOH/NH4(SO4)2双水相系统、酶法脱蛋白、超滤膜等现代分离方法初步从君迁子叶、牛心柿中筛选出两个可用于防治ROU的活性组分；建立自身抗原注射致复发ROU的SD大鼠模型,参照自身免疫病的研究方法,从CD4+T细胞亚群Th17、Treg及相关细胞因子角度探讨了复发ROU的发病和柿子多糖对复发ROU的影响,并通过LPS诱导小鼠巨噬细胞寻找可能的作用信号途径；在1%HCL注射致单相ROU的SD大鼠模型基础上考察了君迁子叶总酚对单相ROU大鼠模型的作用。主要结论如下：1.从君迁子叶中得到TPDPPL粗提取物后,将EtOH/(NH4)2SO4双水相系统应用于其精制纯化,响应面法(RSM)试验结果显示在EtOH质量分数5.0%, (NH4)2SO4质量分数20.0%,pH值7.0工艺条件下TPDPPL得率最高。从牛心柿果实中获得TPsPF提取物后,优化其木瓜蛋白酶脱蛋白工艺,然后选用MWCO分别为200kDa、10kDa的滤膜对10-200 kDa的TPsPF进行富集并筛选出较佳工艺条件,最终得到分子量10-200kDa的TPsPF截留率平均值为45.82%(RSD 2.37%)。2.采用自身抗原注射法建立实验性复发ROU的SD大鼠模型,并以CFA佐剂注射组作为正常对照。组织病理学切片显示MODEL组口腔黏膜上皮部分溶解缺失,提示溃疡形成。ELISA结果表明MODEL组中Treg相关因子TGF-β1和IL-10血清中浓度显著性降低,而Th17相关细胞因子IL-6和IL-17水平显著性上调。FCM检测到MODEL组中CD4+CD25+Foxp3+Treg北例有非常明显的降低。而RT-PCR分析了转录因子Foxp3 mRNA、RORγt mRNA的在组织中的表达,显示MODEL组中Foxp3 mRNA表达极显著降低,同时RORyt mRNA表达极显著升高。上述结果表明从CD4 T细胞亚群来看,MODEL中Th17、CD4+CD25+Foxp3+Treg两者明显向Th17分化偏移。此外,复发ROU模型组外周血TGF-β1、IL-17在溃疡前后的动态变化结果提示IL-17水平在溃疡期与溃疡前期、溃疡后期与溃疡期具有极显著性差异,而TGF-β1在溃疡后期与溃疡期、溃疡后期与溃疡前期存在差异,这些结果为ROU的自限找到合理解释并为进一步寻求复发的原因提供了线索。3.复发ROU大鼠模型用三种不同剂量的TPsPF和泼尼松片给药处理,参照ROU临床疗效评价标准进行评价。hig TPsPF能够显著延长间歇期和减少溃疡数目,还能明显缩小溃疡面积,疗效评价记为I1 N1,评价为显效。ELISA结果表明hig TPsPF能显著提高血清中Treg相关细胞因子TGF-β1水平,从而促进溃疡愈合；同时极显著降低血清中IL-17和IL-6水平。FCM检测到hig TPsPF组相对于MODEL组CD4+CD25+Foxp3+Treg比例有了大幅度提高,提高了1.5倍左右。转录因子Foxp3 mRNA、RORyt mRNA的在组织中的表达显示mid TPsPF和hig TPsPF均能显著提高Foxp3 mRNA在组织中的表达,且各剂量的TPsPF均能够显著降低RORγt mRNA在组织中的表达。据此分析hig TPsPF可以相应通过促进CD4+CD25+Foxp3+Treg分化并显著抑制Th17分化来发挥作用。4.体外培养小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞,检测到TPsPF能以剂量依赖的方式显著抑制LPS诱导引起的NO和IL-6水平上升,显著下调TLR4 mRNA表达,并显著抑制IκBa蛋白降解和NF-κB p65蛋白的磷酸化,显示TPsPF可以经由TLR4/NF-κB信号抑制促炎基因的激活,从而抑制了促炎细胞因子如IL-6等的分泌。5. hig TPDPPL能减小单相ROU大鼠模型的溃疡面积,而mid TPDPPL和hig TPDPPL能显著性缩短溃疡持续天数,且hig TPDPPL能显著降低血清中的IFN-y水平。同时mid TPDPPL和hig TPDPPL对二甲苯引起的KM小鼠急性耳肿胀有抑制作用,表明hig TPDPPL对单相ROU大鼠模型起作用是通过降低IFN-y水平及急性抗炎来实现。此外,镇痛试验结果则表明hig TPDPPL在30 min内能提高小鼠压痛痛阈,但急性镇痛作用不明显。